| 1 |
1
COVID-19 진단을 위한 SARS-CoV-2 포장 RNA(Packaged RNA) 표준물질로, 상기 표준물질은 SARS-CoV-2 유전체(Genbank:MN908947)의 특정 서열 유전자 부위인, 상기 SARS-CoV-2 유전체의 21563번 서열 내지 23473 서열 유전자 부위, 13025번 내지 16405번 서열 유전자 부위 및 26245번 내지 29530번 서열 유전자 부위를 포함하고, 캡시드(capsid)로 포장한 SARS-CoV-2 RNA 및 인간 혈액 세포주 유래 RNA를 포함하는 SARS-CoV-2 포장 RNA(Packaged RNA) 표준물질
|
| 2 |
2
제1항에 있어서,상기 26245번 내지 29530번 서열은 28144 서열이 T에서 C로 치환된 서열인 것인 SARS-CoV-2 포장 RNA(Packaged RNA) 표준물질
|
| 3 |
3
삭제
|
| 4 |
4
삭제
|
| 5 |
5
삭제
|
| 6 |
6
삭제
|
| 7 |
7
ACC65I 제한효소(restriction enzyme)와 BamHI 제한효소(restriction enzyme)를 이용 및 클로닝 하여 제조된 5’ LTR( 5′ long terminal repeat)-패키징 시그날(Ψ, packaging signal)-Rev-응답요소(RRE, Rev-response element)-CPP/CTS 서열(central polypurine tract/central termination sequence)- EF1-lα 프로모터(EF-1α promoter, Human elongation factor 1 alpha promoter)-SARS-CoV-2 유전체(Genbank: MN908947)의 특정 서열 유전자 부위인, 상기 SARS-CoV-2 유전체의 21563번 서열 내지 23473번 서열 유전자 부위, 13025번 내지 16405번 서열 유전자 부위 및 26245번 내지 29530번 서열 유전자 부위가 포함된 다중클로닝 부위 (MCS, Multiple cloning site)-바이러스 전사 후 조절요소(WPRE)-3’LTR(3′ long terminal repeat)으로 구성된 렌티바이러스 재조합벡터와 포장벡터를 숙주세포에 형질 감염시켜, 형질감염된 숙주세포를 제조하는 단계; 상기 형질감염된 숙주세포에서 SARS-CoV-2의 RNA를 농축하여, SARS-CoV-2 포장 RNA를 제조하는 단계; 상기 포장 RNA를 50 내지 70℃에서 1 내지 5분간 열처리 한 다음, 표준물질 매트릭스(matrix)인, 인간 혈액세포주 유래 RNA와 상기 포장 RNA를 혼합하여 RNA 혼합물을 제조하는 단계; 및 상기 RNA 혼합물에서 상기 특정 서열 유전자 부위인 SARS-CoV-2의 21563번 서열 내지 23473번 서열 유전자 부위를 역전사 디지털 중합효소 연쇄반응으로, 서열번호 1의 정방향 프라이머 및 서열번호 2의 역방향 프라이머로 이루어진 프라이머 세트와 서열번호 3의 염기서열의 프로브를 포함하는 분석용 조성물을 이용하여 정량하는 단계;를 포함하는 SARS-CoV-2 포장 RNA 표준물질의 제조방법
|
| 8 |
8
제7항에 있어서,상기 26245번 내지 29530번 서열은 28144 서열이 T에서 C로 치환된 서열인 것인, SARS-CoV-2 포장 RNA 표준물질의 제조방법
|
| 9 |
9
제7항에 있어서,상기 렌티바이러스가 HIV인 SARS-CoV-2 포장 RNA 표준물질의 제조방법
|
| 10 |
10
제7항에 있어서, 상기 숙주세포는 VSV-G 또는 Gag-Pol 유전자가 포함된 포장 벡터(packaging vector)를 포함하는 것인 SARS-CoV-2 포장 RNA 표준물질의 제조방법
|
| 11 |
11
삭제
|
| 12 |
12
제7항에 있어서, 상기 프로브는 양 말단에 리포터(Reporter) 및 소광자(Quencher)가 결합되어 있으며, 상기 리포터는 SYBR 그린(SYBR green), 플루오레신(fluorescein), 플루오레신 클로로트리아지닐(fluorescein chlorotriazinyl), 로다민 그린(rhodamine green), 로다민 레드(rhodamine red), 테트라메틸로다민(tetramethylrhodamine), FITC, 오레곤 그린(Oregon green), 알렉사 플루오로(Alexa Fluor), FAM, JOE, ROX, HEX, Cy3, NED, Cy3
|
| 13 |
13
삭제
|
| 14 |
14
삭제
|
| 15 |
15
삭제
|
| 16 |
16
삭제
|
| 17 |
17
삭제
|
| 18 |
18
삭제
|
| 19 |
19
삭제
|
