1 |
1
답토마이신 비-리보솜성 펩타이드 생합성효소 유전자의 반복 서열 중 하나 이상의 서열이 코돈 리프로그래밍화에 의해 리팩토링된 답토마이신 생합성 유전자 군을 포함하는 DNA 분자
|
2 |
2
제1항에 있어서, 상기 답토마이신 비-리보솜성 펩타이드 생합성 효소 유전자의 반복 서열은 서열번호 3 및 서열번호 4의 프라이머 쌍에 의해 선별된 단위체 서열 내에 포함되며, 상기 유전자의 반복 서열은 상기 단위체 서열의 5,596 내지 7,323번째 염기를 포함하는 A 영역, 12,217 내지 15,225 번째 염기를 포함하는 B 영역 및 16,606 내지 21,951 번째 염기를 포함하는 C 영역을 포함하는 것인 DNA 분자
|
3 |
3
제1항에 있어서, 상기 코돈 리프로그래밍화에 의해 리팩토링된 답토마이신 비-리보솜성 펩타이드 생합성 효소 유전자는 서열번호 7의 염기서열로 이루어진 합성 A영역, 서열번호 8의 염기서열로 이루어진 합성 B영역, 및 서열번호 9의 염기 서열로 이루어진 합성 C영역 중 하나 이상의 영역을 포함하는 것인 DNA 분자
|
4 |
4
제3항에 있어서, 상기 코돈 리프로그래밍화에 의해 리팩토링된 dptBC 답토마이신 비-리보솜성 펩타이드 생합성 효소 유전자는 서열번호 11의 아미노산을 암호화하는 서열을 포함하는 것인 DNA 분자
|
5 |
5
제1항에 있어서, 상기 답토마이신 생합성 유전자 군은 dptA, dptBC ,dptD, dptE, dptF, dptG, dptH, dptI, dptJ, dptM, dptN, dptP, dptR1 및 dptR2 유전자로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 것인 DNA 분자
|
6 |
6
서열번호 10으로 표시되는 코돈 리프로그래밍화된 dptBC 유전자를 포함하는 리팩토링된 답토마이신 생합성 유전자 군을 포함하는 DNA 분자
|
7 |
7
제1항 또는 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DNA 분자는 박테리아 인공 염색체(BAC)로부터 유래된 DNA 서열을 포함하는 것인, DNA 분자
|
8 |
8
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 DNA 분자를 포함하는 벡터
|
9 |
9
제8항에 있어서, 상기 벡터는 플라스미드, 코스미드, BAC 및 효모 인공 염색체(YAC)를 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 벡터
|
10 |
10
제8항의 벡터를 통해 형질 전환된 답토마이신 생합성 유전자 군을 포함하는 DNA를 가지고 있는 숙주 세포
|
11 |
11
제10항에 있어서, 상기 위한 숙주 세포는 스트렙토마이시스 리비단스 (Streptomyces lividans), 스트렙토마이시스 로제오스포로스 (Streptomyces roseosporus), 및 스트렙토마이시스 시엘리칼라 (Streptomyces coelicolor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물로부터 유래된 것인 세포
|
12 |
12
ⅰ) 스트렙토마이스세스 로제오포러스(Streptomyces roseosporus)의 유전체 라이브러리로부터 dptA, dptBC 또는 dptD를 포함하는 답토마이신 생합성 유전자 군을 포함하는 포스미드 클론을 선별하는 단계;ⅱ) 상기 답토마이신 생합성 유전자 군 중, 비-리보솜성 펩타이드 생합성 유전자 (dptBC, NRPS)의 반복 서열을 제거하기 위한 코돈 리프로그래밍화를 수행하는 단계;ⅲ) dptA, dptD 및 리팩토링된 dptBC 유전자를 클로닝하는 단계; 및 ⅳ) 상기 클로닝된 각각의 유전자들을 포함하는 DNA 절편의 서브-클로닝을 통해 재조립하는 단계를 포함하는 리팩토링된 답토마이신 생합성 유전자 군을 클로닝 하는 방법
|
13 |
13
제12항에 있어서, 상기 ⅱ) 단계의 코돈 리프로그래밍화는 dptBC 유전자의 5,596 내지 7,323번째 염기를 포함하는 A 영역, 12,217 내지 15,225 번째 염기를 포함하는 B 영역 및 16,606 내지 21,951번째 염기를 포함하는 C 영역 중 하나 이상의 영역을 각각 치환하여 재구성하는 단계를 포함하는 것인 방법
|
14 |
14
제13항에 있어서, 상기 A 영역, B 영역 및 C 영역은 각각 서열번호 7의 염기서열로 이루어진 합성 A영역, 서열번호 8의 염기서열로 이루어진 합성 B영역, 및 서열번호 9의 염기서열로 이루어진 합성 C영역으로 치환되는 것인 방법
|