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다음 단계를 포함하는, 표적 RNA의 검출 방법:(a) 불활성화된 Cas9(dCas9)과 표적 RNA에 상보적인 gRNA(guide RNA)로 이루어진 dCas9/gRNA 복합체를, 대상으로부터 분리된 생물학적 시료 및 PAMmer와 반응시키는 단계로서,상기 PAMmer는, 표적 RNA에 상보적인 혼성화 뉴클레오타이드 서열을 갖는 3'-제1 혼성화 부위(hybridization portion), PAM (protospacer-adjacent motif) 서열, 및 표적 RNA에 상보적인 혼성화 뉴클레오타이드 서열을 갖는 5'-제2 혼성화 부위를 포함하며, 상기 3'-말단에 검출가능한 시그날을 간접 생성하는 표지 리간드가 결합된 올리고뉴클레오타이드이고; 및 (b) 검출가능한 시그날을 인지하는 항-리간드를 상기 (a) 단계의 반응물에 처리하는 단계
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 상기 3'-말단에 검출가능한 시그날을 간접적으로 생성할 수 있는 표지 리간드는, 비오틴, 디곡시게닌, 압타머 (aptamer), 펩타이드(peptide), 형광 화합물 (fluorescent compound), 올리고뉴클레오타이드 (oligonucleotide) 및 폴리사카라이드 (polysaccharides)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 상기 검출가능한 시그날을 인지하는 항-리간드는 아비딘 또는 아비딘 유사체, 항체, 수용체 및 렉틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상인 것을 특징으로 하는,표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 상기 3'-말단에 검출가능한 시그날을 간접 생성하는 표지 리간드는 비오틴이고;상기 (b) 단계의 검출가능한 시그날을 인지하는 항-리간드는 아비딘 또는 아비딘 유사체인 것을 특징으로 하는,표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 gRNA는 단일 사슬 가이드 RNA인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 gRNA는, 상기 PAMmer의 5'-제2 혼성화 부위와 동일한 서열을 포함하며, 상기 서열은 5 내지 20 뉴클레오타이드 길이인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 PAMmer의 5'-제2 혼성화 부위는, PAM 서열을 기준으로 3' → 5' 방향으로 5 내지 20 뉴클레오타이드 길이인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 상기 PAM 서열은 5'-NGG 또는 NGGNG이고, 상기 N은 임의의 뉴클레오티드로 정의되는 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 dCas9/gRNA 복합체는 고정화된 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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제4항에 있어서, 상기 (b) 단계의 아비딘 유사체는 스트렙타비딘(streptavidin), 뉴트라비딘(neutravidin), 또는 캡타비딘(captavidin)인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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제4항에 있어서, 상기 (b) 단계의 아비딘 또는 아비딘 유사체는 아비딘 또는 아비딘 유사체의 호스래디쉬 과산화수소 컨쥬게이트인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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제11항에 있어서, 상기 (b) 단계에 호스래디쉬 과산화수소 기질은 3,3',5,5'- 테트라메틸벤지딘 (TMB), 2,2'-아지노-디-[3-에틸벤즈티아졸린-6-설폰산] (ABTS), o-페닐렌디아민 디하이드로클로라이드 (OPD), 3,3'-디아미노벤즈이딘 (DAB) 및 루미놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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제4항에 있어서, 상기 방법은 (c) (b) 단계의 반응물의 발색 변화를 육안으로 확인하는 단계;를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 표적 RNA는 바이러스 유래 RNA인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출 방법
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다음을 포함하는 표적 RNA 검출용 키트:(a) dCas9과 표적 RNA에 상보적인 guide RNA(gRNA)를 포함하는 기판 표면에 고정화된 dCas9/gRNA 복합체;(b) 표적 RNA에 상보적인 혼성화 뉴클레오타이드 서열을 갖는 3'-제1 혼성화 부위(hybridization portion), PAM (protospacer-adjacent motif) 서열, 및 표적 RNA에 상보적인 혼성화 뉴클레오타이드 서열을 갖는 5'-제2 혼성화 부위를 포함하며, 3'-말단에 검출가능한 시그날을 간접 생성하는 표지 리간드가 결합된 PAMmer; 및(c) 검출가능한 시그날을 인지하는 항-리간드
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제15항에 있어서, 상기 3'-말단에 검출가능한 시그날을 간접 생성하는 표지 리간드는 비오틴, 디곡시게닌, 압타머 (aptamer), 펩타이드(peptide), 형광 화합물 (fluorescent compound), 올리고뉴클레오타이드 (oligonucleotide) 및 폴리사카라이드 (polysaccharides) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출용 키트
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제15항에 있어서, 상기 검출가능한 시그날을 인지하는 항-리간드는 아비딘 또는 아비딘 유사체, 항체, 수용체 및 렉틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 표적 RNA 검출용 키트
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다음을 포함하는 표적 RNA 검출용 키트:(a) dCas9과 표적 RNA에 상보적인 guide RNA(gRNA)를 포함하는 기판 표면에 고정화된 dCas9/gRNA 복합체;(b) 표적 RNA에 상보적인 혼성화 뉴클레오타이드 서열을 갖는 3'-제1 혼성화 부위(hybridization portion), PAM (protospacer-adjacent motif) 서열, 및 표적 RNA에 상보적인 혼성화 뉴클레오타이드 서열을 갖는 5'-제2 혼성화 부위를 포함하며, 3'-말단에 비오틴-결합된 PAMmer; (c) 아비딘 또는 아비딘 유사체의 호스래디쉬 과산화수소 컨쥬게이트; 및 (d) 호스래디쉬 과산화수소 기질
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