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형광 프로브를 사용하는 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법에 있어서,a) 타겟 유전자 서열 및 오염 판단 유전자 서열을 포함하는 양성 대조군유전자가 포함된 양성 대조군을 준비하는 단계;b) 검체로부터 유전자를 수득하여 검사 대상군을 준비한 후 상기 검사 대상군에 내부 대조군 유전자를 첨가하는 단계; 및c) 상기 양성 대조군 및 검사 대상군에 타겟 유전자, 오염 판단 유전자 및 내부 대조 유전자와 각각 결합 가능한 프로브를 첨가하고, 실시간 핵산 증폭반응(PCR) 진행하는 단계를 포함하고,상기 오염 판단 유전자 및 내부 대조 유전자 각각과 결합 가능한 프로브의 가수분해에 따라 동일한 파장에서 발광하는 것을 특징으로 하는, 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제1 항에 있어서, d) 상기 c) 단계의 핵산 증폭반응 결과 내부 대조군 유전자와 결합하는 프로브에 결합된 형광체의 파장에서 발광하는 경우 실시간 핵산 증폭 반응이 정상적으로 진행되었음을 확인하는 단계를 더 포함하는, 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제2 항에 있어서,e) 상기 d) 단계의 내부 대조군 유전자와 결합 가능한 프로브가 발광하는 파장에서, 추가적인 형광 세기가 확인되는 경우 양성 대조군에 의해 검사 대상군이 오염되었음을 판별하는 단계를 포함하는, 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제1 항에 있어서,상기 오염 판단 유전자 서열은 15bp 내지 40bp의 길이를 갖는 DNA 또는 RNA 서열인, 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제 1 항에 있어서,상기 프로브는 핵산 올리고머가 형광체(fluorophore) 및 소광체(quencher)와 결합된 것인, 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제 5 항에 있어서, 상기 프로브는 상기 타겟 유전자 서열의 증폭을 위한 정방향 또는 역방향 프라이머에 의해 가수분해되어 형광이 나타나는 태그맨(TaqMan) 프로브, 태그맨 MGB 프로브, 상보적인 서열과 결합된 상태에서 RNase H에 의해 절단된 후 프라이머에 의해 가수분해되어 형광을 발생시키는 사이클링 프로브(Cycling Probe), 상보적인 서열과 결합된 상태에서 형광을 발하는 분자 비콘(Molecular Beacon), 스콜피온 프로브(Scorpion probe), 및 프렛(FRET) 원리를 이용하는 핵산 올리고머를 포함하는 프로브로 이루어진 군에서 선택된 적어도 어느 하나의 프로브인, 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제 1 항에 있어서, 내부 대조군 유전자와 상보적인 프로브에 결합하는 형광체는 오염 판단 유전자 서열과 상보적인 프로브에 결합하는 형광체와 동일하거나, 발광 시 동일한 파장대를 갖는 형광체인, 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제 6 항에 있어서,RT-qPCR 또는 qPCR반응을 통한 진단 검사에서 내부 대조군 주형의 검출은 내부 대조군의 형광 값이 최초로 증가하는 시점 (Ct 값)이 5 이상, 35이하의 값을 가지며, 이후 10 사이클 이내에, 형광 값(FI, Fluorescence Intensity 또는 RFU, Relative Fluorescence Units)이 일정한 값에 도달하여 유지되도록 내부 대조군 검출을 위한 프로브의 양을 조절하는 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제 8 항에 있어서,내부 대조군 검출에 사용된 형광 값(FI, Fluorescence Intensity 또는 RFU, Relative Fluorescence Units)이 일정하게 유지되다가 다시 증가하는 현상에 의해 양성 대조군에 의한 오염 여부를 판단하는, 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법
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제9 항에 있어서,상기 내부 대조군의 형광 값이 다시 증가하는 시점 (Ct 값) 의해 오염 정도를 반정량적으로 평가하고, 상기 양성 대조군 주형에 의한 오염이 결과에 미친 정도는 하기 수학식 1에 의해 산출되고, 정량적인 평가가 가능한 실시간 핵산 증폭 반응에 의한 위양성 판별 방법:003c#수학식 1003e#
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