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타겟 유전자 영역에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 가이드 RNA로서, 상기 뉴클레오타이드 서열은i) 오프-타겟 유전자 영역에 대해 원래 (original) 하나의 미스매치를 포함하고;ii) 타겟 유전자 영역 및 오프-타겟 유전자 영역에 대해 의도적인 (intentional) 하나 또는 두 개의 미스매치를 포함하며;상기 원래 하나의 미스매치와 의도적인 하나 또는 두 개의 미스매치는 서로 상이한 위치에 도입되는, 가이드 RNA
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제1항에 있어서, 상기 원래 하나의 미스매치와 의도적인 하나 또는 두 개의 미스매치는 각각 가이드 RNA의 뉴클레오타이드 서열의 프로토스페이서-인접 모티프 (protospacer-adjacent motif)로부터 +1 위치 내지 +20 위치 중 서로 상이한 위치에 도입되는, 가이드 RNA
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제2항에 있어서, 상기 의도적인 하나 또는 두 개의 미스매치는 가이드 RNA의 뉴클레오타이드 서열의 프로토스페이서-인접 모티프 (protospacer-adjacent motif)로부터 +1 위치 및 +18 위치 중 하나 또는 두 개에 도입되는, 가이드 RNA
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제1항에 있어서, 상기 타겟 유전자는 CCR5이고, 상기 오프-타겟 유전자는 CCR2인, 가이드 RNA
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제4항에 있어서, 서열번호 1 내지 19로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 각 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 의도적인 미스매치가 도입되고, 상기 서열번호 1 내지 19의 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프 서열은 제외되는, 가이드 RNA
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제5항에 있어서,서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +15 위치 및 +17 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 2의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +11 위치 및 +13 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +8 위치 및 +10 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 4의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 및 +3 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +14 위치 및 +16 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 6의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +13 위치 및 +15 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 7의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +15 위치 및 +17 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 8의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +12 위치 및 +14 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 9의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +4 위치 및 +6 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 10의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +2 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +19 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 12의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +9 위치 및 +11 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 13의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +13 위치 및 +15 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 14의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +9 위치 및 +11 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 15의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +13 위치 및 +15 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 16의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +18 위치 및 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 17의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 18의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +18 위치 및 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나; 또는서열번호 19의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +19 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되고;상기 서열번호 1 내지 19의 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프 서열은 제외되는, 가이드 RNA
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7
제4항에 있어서, 서열번호 1 내지 19로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 각 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +10 위치 및 +18 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되고, 상기 서열번호 1 내지 19의 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프 서열은 제외되는, 가이드 RNA
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8
제6항에 있어서, 서열번호 20 내지 95로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 가이드 RNA
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제7항에 있어서, 서열번호 96 내지 125로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 가이드 RNA
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제1항에 있어서, 상기 타겟 유전자는 점 돌연변이 (point mutation)를 포함하는 유전자이고, 상기 오프-타겟 유전자는 야생형 유전자인, 가이드 RNA
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11
제10항에 있어서, 상기 타겟 유전자는 KRAS G12D, G12C 또는 G12V 점 돌연변이를 포함하는 유전자이고, 상기 오프-타겟 유전자는 야생형 KRAS 유전자인, 가이드 RNA
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12
제11항에 있어서, 서열번호 413 내지 416로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 각 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 의도적인 미스매치가 도입되고, 상기 서열번호 413 내지 416의 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프 서열은 제외되는, 가이드 RNA
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13
제12항에 있어서,서열번호 413의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +2 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 414의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +6 위치 및 +8 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나;서열번호 415의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +2 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되거나; 또는서열번호 416의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +6 위치 및 +8 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되고;상기 서열번호 413 내지 416의 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프 서열은 제외되는, 가이드 RNA
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제13항에 있어서, 서열번호 413 내지 416로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 각 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +10 위치 및 +18 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 전이 또는 전좌 돌연변이를 유발하여 의도적인 미스매치가 도입되고, 상기 서열번호 413 내지 416의 뉴클레오타이드 서열에서 프로토스페이서-인접 모티프 서열은 제외되는, 가이드 RNA
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제14항에 있어서, 서열번호 427 내지 438로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 가이드 RNA
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16
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가이드 RNA는 야생형 가이드 RNA의 온-타겟 활성의 50% 이상을 유지하고, 야생형 가이드 RNA에 비해 감소된 오프-타겟 활성을 나타내거나 오프-타겟 활성이 없는, 가이드 RNA
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(a) 타겟 유전자 영역에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 오프-타겟 유전자 영역에 대해서는 원래 (original) 하나의 미스매치를 포함하는 가이드 RNA를 선별하는 단계; 및(b) 선별된 가이드 RNA의 뉴클레오타이드 서열의 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +1 위치 내지 +20 위치 중 어느 하나 또는 두 개에 의도적인 미스매치를 도입하는 단계를 포함하며,이때, 상기 원래 하나의 미스매치와 상기 하나 또는 두 개의 의도적인 미스매치는 서로 상이한 위치에 도입되는, 가이드 RNA의 제조방법
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18
제17항에 있어서, 상기 단계 (b)의 의도적 미스매치는 선별된 가이드 RNA의 뉴클레오타이드 서열의 프로토스페이서-인접 모티프로부터 +10 위치 내지 +18 위치 중 하나 또는 두 개에 도입되는, 가이드 RNA의 제조방법
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제17항에 있어서, 상기 방법으로부터 제조된 RNA는 야생형 가이드 RNA의 온-타겟 활성의 50% 이상을 유지하고, 야생형 가이드 RNA에 비해 감소된 오프-타겟 활성을 나타내거나, 오프-타겟 활성이 없는, 가이드 RNA의 제조방법
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 가이드 RNA를 이용한 CRISPR 시스템의 정확도를 향상시키는 방법
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 가이드 RNA를 포함하는, 유전자 교정용 조성물
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 가이드 RNA를 포함하는, 점 돌연변이 (point mutation)로 야기되는 질환 또는 후천성면역결핍증의 예방 또는 치료용 약학 조성물
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 가이드 RNA를 포함하는, 점 돌연변이 (point mutation)로 야기되는 질환의 진단용 조성물
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 가이드 RNA를 이용한 유전자 표적 방법
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제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 가이드 RNA를 이용한 유전자 교정 방법
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