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1) 골수-유래 대식세포에 파골세포 분화 촉진제 및 분석하고자 하는 피검물질을 처리하는 단계;2) 상기 단계 1)의 세포 내 Slc7a11(solute carrier family 7 member 11) 유전자 프로모터에서 H3K9me3(trimethylated histone H3 at lysin 9) 또는 Nrf2(nuclear factor erythroid 2-related factor) 단백질의 결합 수준을 측정하는 단계; 및3) 상기 단계 2)의 측정 결과, Slc7a11 유전자 프로모터에서 H3K9me3 단백질의 결합 수준이 피검 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 감소하거나, Nrf2 단백질의 결합 수준이 피검 물질을 처리하지 않은 대조군에 비해 증가하는 경우 상기 피검물질을 골질환 치료용 조성물로 판별하는 단계를 포함하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 1)에서 파골세포 분화 촉진제는 M-CSF(macrophage colony-stimulating factor) 또는 RANK(receptor for activation of nuclear factor kappa b)인 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 피검물질은 펩티드, 단백질, 비펩티드성 화합물, 활성 화합물, 발효 생산물, 대사산물, 효소, 항체 및 생활성 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 2)에서 Slc7a11 유전자 프로모터에서 H3K9me3 또는 Nrf2 단백질의 결합 부위는 Slc7a11 유전자 프로모터 영역 내 ARE(antioxidant response element)인 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 4항에 있어서, 상기 ARE는 Slc7a11 유전자의 전사개시시점(TSS, +1)으로부터 -39 내지 -48 bp 위치의 ARE 또는 -863 내지 -871 bp 위치의 ARE인 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 1항에 있어서, 상기 결합 수준은 EMSA(Electrophoresis Mobility Shift Assay), ChIP (Chromatin immunoprecipitation assay), ChIP-seq 분석, ChIP-chip 분석, 겔 쉬프트 분석(Gel Shift assay), DNase 발자국 분석(DNase footprinting assay), DNA-풀다운 분석(DNA-full down assay) 및 SPR(Surface plasmon resonance)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정하는 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 세포 내 Slc7a11 유전자 또는 단백질 발현 수준을 측정하고, 피검 물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 7항에 있어서, 상기 단계 1)의 세포 내 Slc7a11 유전자 또는 단백질 발현 수준이 피검 물질을 처리하지 않은 대조군과 비해 증가하는 경우 피검물질을 골질환 치료용 조성물로 판별하는 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 7항에 있어서, 상기 발현 수준은 정량적 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction), 실시간 RT-PCR, 웨스턴 블럿팅, 노던 블럿팅(Northern blotting), DNA 칩 분석, 단백질 칩 분석, 리간드 바인딩 분석법(ligand binding assay), 방사선 면역분석법, 조직면역 염색, 면역측정법 및 효소면역측정법으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정하는 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 1항에 있어서, 상기 골질환은 류마티스성 관절염, 골관절염, 퇴행성 관절염, 골다공증(osteoporosis), 인공관절 주위 골용해(periprosthetic osteolysis), 임플란트의 피로잔해에 의한 골용해, 파제트병(Paget's disease), 골연화증, 구루병, 골감소증, 칼슘조절이상, 전이성 골암 (metastatic bone cancer), 염증성 골소실, 내분비 질환 또는 약물에 의한 이차성 골손실(secondary bone loss) 및 치조골의 파괴가 동반되는 치주질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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1) H3K9me3 단백질, Nrf2 단백질 및 Slc7a11 유전자 프로모터 DNA를 제작하는 단계;2) 반응용기에서 상기 단계 1)에서 제작한 H3K9me3 단백질, Nrf2 단백질 및 Slc7a11 유전자 프로모터 DNA를 결합시키는 단계;3) 상기 단계 2)의 결합체에 피검물질을 처리하고, 결합체 및 피검물질의 결합 여부를 측정하는 단계; 및4) 상기 단계 3)의 측정 결과, 피검물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 H3K9me3 단백질과 Slc7a11 유전자 프로모터 DNA의 결합을 억제하고, Nrf2 단백질과 Slc7a11 유전자 프로모터 DNA의 결합을 촉진하는 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 11항에 있어서,상기 단계 3)에서 히스톤 탈메틸화효소(histone demethylase)을 처 처리하는 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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1) 골수-유래 대식세포주에 Slc7a11 유전자 프로모터 및 이에 작동가능하도록 연결된 리포터 유전자(repoter gene)를 포함하는 발현벡터를 형질감염하는 단계;2) 상기 단계 1)의 형질전환된 세포주에 파골세포 분화 촉진제 및 분석하고자 하는 피검물질을 처리하는 단계;3) 상기 세포주 내의 리포터 유전자의 발현 수준이 피검물질을 처리하지 않은 대조군에 비하여 증가한 피검물질을 선별하는 단계를 포함하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 13항에 있어서, 상기 단계 1)의 리포터 유전자는 클로람페니콜아세틸트랜스퍼라제(CAT) 유전자, 베타-글루쿠로니다제(GUS) 유전자, 루시퍼라제(luciferase) 유전자, 베타-갈락토시다제 유전자 및 형광 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 14항에 있어서, 상기 형광 단백질은 그린 형광 단백질(green fluorescent protein; GFP), 레드 형광 단백질(red fluorescent protein; RFP), 블루 형광 단백질(blue fluorescent protein; BFP), 옐로우 형광 단백질(yellow fluorescent protein; YFP), 시안 형광 단백질(CFP; cyan fluorescent protein) 및 강화된 녹색 형광단백질(enhanced green fluorescent protein; EGFP)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 골질환 치료용 조성물의 스크리닝 방법
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제 14항에 있어서, 상기 리포터 유전자가 형광 단백질일 경우, 리포터 유전자의 발현 수준은 형광 현미경을 이용하여 측정하는 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법
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H3K9me3 탈메틸화 촉진제를 유효성분으로 함유하는, 골질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제 17항에 있어서, 상기 H3K9me3 탈메틸화 촉진제는 알파-케토글루타레이드(α-ketoglutarate)인 것을 특징으로 하는, 골질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제 17항에 있어서, 상기 골질환은 류마티스성 관절염, 골관절염, 퇴행성 관절염, 골다공증(osteoporosis), 인공관절 주위 골용해(periprosthetic osteolysis), 임플란트의 피로잔해에 의한 골용해, 파제트병(Paget's disease), 골연화증, 구루병, 골감소증, 칼슘조절이상, 전이성 골암 (metastatic bone cancer), 염증성 골소실, 내분비 질환 또는 약물에 의한 이차성 골손실(secondary bone loss) 및 치조골의 파괴가 동반되는 치주질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 골질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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H3K9me3 탈메틸화 촉진제를 유효성분으로 함유하는, 골질환 예방 또는 개선용 건강기능식품
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