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표적 유전자간부위(intergenic region)의 상부 단편 서열, 서열번호 2의 염기 서열로 구성된 trc 프로모터 및 이에 의해 조절되는 서열번호 25의 염기 서열로 구성된 Cre 단백질을 암호화하는 서열, 양 말단에 서열번호 26의 염기 서열로 구성되는 lox66 또는 서열번호 27의 염기 서열로 구성되는 lox71 염기 서열을 포함하는 항생제 저항성 관련 단백질을 암호화하는 서열, 서열번호 3의 염기 서열로 구성된 lacⅠq 단백질을 암호화하는 서열 및 표적 유전자간부위(intergenic region)의 하부 단편 서열이 순차적으로 연결된 폴리뉴클레오티드
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1) 제 1항의 폴리뉴클레오티드를 균주 내에 도입하는 단계; 및2) 상기 균주의 표적 유전자간부위(intergenic region)에 trc 프로모터 및 이에 의해 조절되는 Cre 단백질을 암호화하는 서열, 양 말단에 lox 염기 서열을 포함하는 항생제 저항성 관련 단백질을 암호화하는 서열 및 lacⅠq 단백질을 암호화하는 서열이 삽입되는 단계;를 포함하는 변이 균주의 제조방법
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1) 제 1항의 폴리뉴클레오티드를 균주 내에 도입하는 단계; 2) 상기 균주의 표적 유전자간부위(intergenic region)에 trc 프로모터 및 이에 의해 조절되는 Cre 단백질을 암호화하는 서열, 양 말단에 lox 염기 서열을 포함하는 항생제 저항성 관련 단백질을 암호화하는 서열 및 lacⅠq 단백질을 암호화하는 서열이 삽입되는 단계; 및3) IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)가 첨가된 배지에 배양하여 항생제 저항성 관련 단백질을 암호화하는 서열을 제거하는 단계를 더 포함하는 변이 균주의 제조방법
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제 8항의 제조방법으로 제조된 변이 균주
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제 9항의 변이 균주에 표적 서열의 상부 단편 서열, lox 핵산 단편, 항생제 내성 관련 단백질을 암호화하는 서열, lox 핵산 단편 및 표적 서열의 하부 단편 서열이 순차적으로 연결된 폴리뉴클레오티드를 도입하여 변이 균주의 목적유전자를 변형하는 방법
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제 10항에 있어서, 상기 목적유전자가 변형된 변이 균주를 IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)가 첨가된 배지에 배양하여 항생제 저항성 관련 단백질을 암호화하는 서열이 제거된, 변이 균주의 목적유전자를 변형하는 방법
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제 10항에 있어서, 상기 변형은 목적유전자 서열의 치환, 결실 또는 목적 서열을 삽입하는 것인 목적유전자를 변형하는 방법
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