| 1 |
1
독소작용제인 리신(Ricin) 독소, 포도상구균 엔테로톡신 B(SEB) 독소, 및 보툴리눔 A(BoNT-A) 독소의 유전자 중에서 둘 이상 선택된 유전자를 동시에 진단하고 검출하고 정량하기 위한 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 사용되는 하기 표 1에 기재된 리신 독소 유전자의 뉴클레오타이드 서열 1과 뉴클레오타이드 서열 2의 프라이머 세트, 포도상구균 엔테로톡신 B 독소 유전자의 뉴클레오타이드 서열 3과 뉴클레오 타이드 서열 4의 프라이머 세트, 및 보툴리눔 A 독소 유전자의 뉴클레오타이드 서열 5와 뉴클레오타이드 서열 6의 프라이머 세트 중에서 둘 이상 선택된 프라이머 세트를 포함하는 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트
|
| 2 |
2
제 1 항에 있어서, 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트는 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법으로 상기 프라이머 세트와 독소작용제 유전자 주형(template)이 변성 및 혼성화 (hybridization)하여 프라이머 세트-독소작용제 유전자 주형의 혼성화물을 형성하는 단계; 상기 프라이머 세트-독소작용제 유전자 주형의 혼성화물을 실시간 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)으로 증폭하는 단계; 및 상기 증폭된 프라이머 세트-독소작용제 유전자 주형의 혼성화물의 증폭 곡선을 실시간으로 모니터링하여 독소작용제 유전자를 진단, 검출 및 정량하는 단계;를 수행하여 상기 리신(Ricin) 독소, 포도상구균 엔테로톡신 B(SEB) 독소, 및 보툴리눔 A(BoNT-A) 독소의 유전자 중에서 둘 이상 선택된 유전자를 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트를 사용하여 동시에 진단하고 검출하고 정량하는 것을 특징으로 하는 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트
|
| 3 |
3
제 1 항에 있어서, 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에서 상기 리신(Ricin) 독소, 포도상구균 엔테로톡신 B(SEB) 독소, 및 보툴리눔 A(BoNT-A) 독소의 유전자 중에서 둘 이상 선택된 유전자를 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트를 사용하여 동시에 진단하고 검출하고 정량할 때 검출직선인 하기 식 1에 의해 정량하는 것을 특징으로 하는 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트
|
| 4 |
4
독소작용제인 리신(Ricin) 독소, 포도상구균 엔테로톡신 B(SEB) 독소, 및 보툴리눔 A(BoNT-A) 독소의 유전자 중에서 둘 이상 선택된 유전자를 동시에 진단하고 검출하고 정량하기 위한 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 사용되는 하기 표 2에 기재된 CY5, VIC, 또는 FAM의 형광발색제(Fluorescent reporter dye)로 TaqMan 프로브의 5' 말단이 표지되며, 소광제를 사용하지 않거나 MGB-NFQ의 소광제(Quenching dye)로 TaqMan 프로브의 3' 말단이 표지되고, 청구항 제1항의 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트가 독소작용제 유전자 주형(template)을 따라 연장됨에 따라 TaqMan 프로브가 Taq DNA 중합효소의 5' 뉴클레아제 활성에 의해 증폭(amplification) 또는 복제(replication)로 인해 생성된 DNA 또는 RNA 조각인 앰플리콘(Amplicon)으로 분할되는 리신 독소 유전자의 뉴클레오타이드 서열 7을 포함하는 TaqMan 프로브; 포도상구균 엔테로톡신 B 독소 유전자의 뉴클레오타이드 서열 8을 포함하는 TaqMan 프로브; 및 보툴리눔 A 독소 유전자의 뉴클레오타이드 서열 9를 포함하는 TaqMan 프로브 중에서 둘 이상 선택된 TaqMan 프로브를 포함하는 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 TaqMan 프로브
|
| 5 |
5
제 4 항에 있어서, 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 TaqMan 프로브는 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법으로 상기 TaqMan 프로브와 독소작용제 유전자 주형(template)이 변성 및 혼성화 (hybridization)하여 TaqMan 프로브-독소작용제 유전자 주형의 혼성화물을 형성하는 단계; 상기 TaqMan 프로브-독소작용제 유전자 주형의 혼성화물이 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트가 독소작용제 유전자 주형 (template)을 따라 연장됨에 따라 Taq DNA 중합효소의 5' 뉴클레아제 활성에 의해 앰플리콘으로 분할되는 단계; 상기 앰플리콘으로 분할된 TaqMan 프로브-독소작용제 유전자 주형의 혼성화물에서 형광발색제의 신호를 증가시키는 상기 MGB-NFQ의 소광제(Quenching dye)로 부터 상기 CY5, VIC, 또는 FAM의 형광발색제(Fluorescent reporter dye)가 분리되는 단계; 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트가 독소작용제 유전자 주형의 말단까지 연장되어 상기 TaqMan 프로브를 제거하는 단계; 및 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법의 유전자 주형의 증폭 곡선을 상기 분할된 앰플리콘의 양에 비례하는 형광발색제의 형광 강도로 실시간으로 모니터링하여 독소작용제 유전자를 진단, 검출 및 정량하는 단계;를 수행하여 상기 리신(Ricin) 독소, 포도상구균 엔테로톡신 B(SEB) 독소, 및 보툴리눔 A(BoNT-A) 독소의 유전자 중에서 둘 이상 선택된 유전자를 동시에 진단하고 검출하고 정량하는 것을 특징으로 하는 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 TaqMan 프로브
|
| 6 |
6
제 4 항에 있어서, 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에서 상기 리신(Ricin) 독소, 포도상구균 엔테로톡신 B(SEB) 독소, 및 보툴리눔 A(BoNT-A) 독소의 유전자 중에서 둘 이상 선택된 유전자를 상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 TaqMan 프로브를 사용하여 동시에 진단하고 검출하고 정량할 때 검출직선인 하기 식 1에 의해 정량하는 것을 특징으로 하는 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 TaqMan 프로브
|
| 7 |
7
제 4 항에 있어서,상기 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 TaqMan 프로브의상기 리신 독소 검출 함량은 8
|
| 8 |
8
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 기재된 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 프라이머 세트를 적용한 분석기기
|
| 9 |
9
제 8 항에 있어서,상기 분석기기는 임상시료, 환경시료, 또는 식료품에서 상기 독소를 분석하는 독소 진단키트, 독소 검출기기, 및 독소 정량기기로 이루어진 군에서 하나 이상 선택되는 것을 특징으로 하는분석기기
|
| 10 |
10
제 4 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 기재된 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응법에 최적화된 TaqMan 프로브를 적용한 분석기기
|
| 11 |
11
제 10 항에 있어서,상기 분석기기는 임상시료, 환경시료, 또는 식료품에서 상기 독소를 분석하는 독소 진단키트, 독소 검출기기, 및 독소 정량기기로 이루어진 군에서 하나 이상 선택되는 것을 특징으로 하는분석기기
|
