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i) 제1DNA와 제1결합제가 결합되어 있는 제1DNA-제1결합제 접합체;ii) 제1DNA에 상보적인 서열을 갖는 제1DNA'와 프로테아제(protease)가 결합되어 있는 제1DNA'-protease 접합체;iii) 제2DNA와 제2결합제가 결합되어 있는 제2DNA-제2결합제 접합체;iv) 제2DNA에 상보적인 서열을 갖는 제2DNA'와 효소원(zymogen)이 결합되어 있는 제2DNA'-zymogen 접합체; 및v) 상기 효소원에 특이적인 기질을 포함하는 표적물질 검출용 조성물
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제1항에 있어서, 상기 제1결합제 및 제2결합제는 서로 동일 또는 상이한 것을 특징으로 하는 조성물
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제1항에 있어서, 상기 결합제는 상기 표적물질에 결합할 수 있는 항체, 압타머, 항원, 소분자(small molecules) 또는 단백질인 것을 특징으로 하는 조성물
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제3항에 있어서, 상기 항체는 트라스투주맙(trastuzumab), 퍼투주맙(pertuzumab) 또는 항-cTnI 항체이며; 상기 항원은 디곡시게닌(Digoxigenin; Dig) 또는 인간 융모성 생식선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG)인 것을 특징으로 하는 조성물
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5
제1항에 있어서, 상기 표적물질은 항원, 항체, 소분자(small molecules) 또는 단백질인 것을 특징으로 하는 조성물
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6
제5항에 있어서, 상기 항원은 HER2, cTnI 또는 트롬빈(thrombin)이며; 상기 항체는 항-디곡시게닌(Digoxigenin; Dig) 항체 또는 항-인간 융모성 생식선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG) 항체인 것을 특징으로 하는 조성물
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7
제1항에 있어서, 상기 표적물질이 HER2인 경우, 상기 제1결합제는 트라스투주맙(trastuzumab)이고, 상기 제2결합제는 퍼투주맙(pertuzumab)인 것을 특징으로 하는 조성물
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8
제1항에 있어서, 상기 표적물질이 심장 트로포닌 I(cardiac troponin I; cTnI)인 경우, 상기 제1결합제는 제1 항-cTnI 항체이고, 상기 제2결합제는 제2 항-cTnI 항체인 것을 특징으로 하는 조성물
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9
제1항에 있어서, 상기 표적물질이 트롬빈(thrombin)인 경우, 상기 제1결합제는 트롬빈과 결합할 수 있는 제1압타머이고, 상기 제2결합제는 트롬빈과 결합할 수 있는 제2압타머인 것을 특징으로 하는 조성물
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10
제9항에 있어서, 상기 제1압타머는 서열번호 7로 표시되고, 상기 제2압타머는 서열번호 8로 표시되며, 상기 제1DNA는 서열번호 5로 표시되고, 상기 제2DNA는 서열번호 6으로 표시되는 것을 특징으로 하는 조성물
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11
제1항에 있어서, 상기 표적물질이 항-디곡시게닌(Digoxigenin; Dig) 항체인 경우, 상기 제1결합제 및 제2결합제는 디곡시게닌(Digoxigenin; Dig)인 것을 특징으로 하는 조성물
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제1항에 있어서, 상기 표적물질이 항-인간 융모성 생식선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG) 항체인 경우, 상기 제1결합제 및 제2결합제는 인간 융모성 생식선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin; hCG)인 것을 특징으로 하는 조성물
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제1항에 있어서, 상기 표적물질이 소분자(small molecules)인 경우, 상기 제1결합제 및 제2결합제는 상기 표적물질과 동일한 소분자이며, 항-소분자 항체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물
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14
제13항에 있어서, 상기 소분자가 디곡시게닌(Digoxigenin; Dig)인 경우, 상기 항-소분자 항체는 항-Dig 항체인 것을 특징으로 하는 조성물
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15
제1항에 있어서, 상기 제1DNA는 서열번호 1로 표시되고, 상기 제2DNA는 서열번호 2로 표시되는 것을 특징으로 하는 조성물
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16
제1항에 있어서, 상기 프로테아제는 Tobacco Etch Virus (TEV) protease, Hepatitis C Virus (HCV) protease, Tobacco vein mottling virus (TVMV) protease 또는 Human rhinovirus (HRV) 3c protease인 것을 특징으로 하는 조성물
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17
제1항에 있어서, 상기 효소원은 효소와 효소 활성 저해제인 단백질이 상기 프로테아제에 의해 절단 가능한 펩타이드 링커를 통해 연결된 것을 특징으로 하는 조성물
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18
다음 단계를 포함하는 표적물질의 검출방법:(a) 제1항의 조성물에 표적물질을 함유하는 샘플을 혼합하는 단계; (b) 상기 표적물질을 제1DNA-제1결합제 접합체의 제1결합제 및 제2DNA-제2결합제 접합체의 제2결합제에 결합시킨 다음, 상기 제1결합제에 연결된 제1DNA를 프로테아제(protease)에 연결된 제1DNA'와 혼성화(hybridization)시키고, 상기 제2결합제에 연결된 제2DNA를 효소원(zymogen)에 연결된 제2DNA'와 혼성화시키는 단계; 및(c) 상기 제1결합제의 제1DNA와 혼성화된 제1DNA'-protease 접합체 및 제2결합제의 제2DNA와 혼성화된 제2DNA'-zymogen 접합체의 근접 단백질가수분해 반응(proximity proteolysis reaction)에 의해 발생하는 신호를 검출하는 단계
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제18항에 있어서, 상기 효소원은 효소와 효소 활성 저해제인 단백질이 상기 프로테아제에 의해 절단 가능한 펩타이드 링커를 통해 연결된 것을 특징으로 하는 표적물질의 검출방법
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제18항에 있어서, 상기 (d)단계의 근접 단백질가수분해 반응은 상기 프로테아제에 의해 펩타이드 링커가 절단됨으로써 상기 효소원이 효소와 효소 활성 저해제인 단백질로 분리되어 효소가 활성화되는 단계; 및상기 활성화된 효소가 기질을 가수분해하여 신호를 생성하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 표적물질의 검출방법
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제18항에 있어서, 상기 프로테아제는 Tobacco Etch Virus (TEV) protease, Hepatitis C Virus (HCV) protease, Tobacco vein mottling virus (TVMV) protease 또는 Human rhinovirus (HRV) 3c protease인 것을 특징으로 하는 표적물질의 검출방법
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제18항에 있어서, 상기 효소원은 β-lactamase zymogen이고, 상기 기질은 CENTATM이며, 상기 샘플이 표적물질을 함유하는 경우, 405nm에서 흡광도의 변화량이, 표적물질을 함유하지 않은 경우의 흡광도의 변화량보다, 증가한 것을 특징으로 하는 표적물질의 검출방법
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제18항에 있어서, 상기 효소원은 β-lactamase zymogen이고, 상기 기질은 Nitrocefin이며, 상기 샘플이 표적물질을 함유하는 경우 빨간색 신호를 나타내고, 표적물질을 함유하지 않은 경우 노란색 신호를 나타내는 것을 특징으로 하는 표적물질의 검출방법
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다음 단계를 포함하는 소분자(small molecules)의 검출방법:(a) 제13항의 조성물에 소분자를 함유하는 샘플을 혼합하는 단계; (b) 상기 제1결합제에 연결된 제1DNA를 프로테아제(protease)에 연결된 제1DNA'와 혼성화(hybridization)시키고, 상기 제2결합제에 연결된 제2DNA를 효소원(zymogen)에 연결된 제2DNA'와 혼성화시키는 단계; 및(c) 상기 혼성화된 제1DNA'-protease 접합체와 상기 혼성화된 제2DNA'-zymogen 접합체의 근접 단백질가수분해 반응(proximity proteolysis reaction)의 유발 유무를 기반으로 소분자의 유무를 검출하는 단계
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제24항에 있어서, 상기 (a) 단계의 샘플이 소분자를 함유하는 경우, 상기 소분자가 항-소분자 항체에 결합함으로써, 상기 (c) 단계의 근접 단백질가수분해 반응은 일어나지 않고, 상기 반응에 의해 발생하는 신호가 없는 것을 특징으로 하는 소분자의 검출방법
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제24항에 있어서, 상기 (a) 단계의 샘플이 소분자를 함유하지 않은 경우, 상기 항-소분자 항체가 제1DNA-제1결합제 접합체의 제1결합제 및 제2DNA-제2결합제 접합체의 제2결합제에 결합함으로써, 상기 (c) 단계의 혼성화된 제1DNA'-protease 접합체와 상기 혼성화된 제2DNA'-zymogen 접합체의 근접 단백질가수분해 반응에 의해 신호가 발생하는 것을 특징으로 하는 소분자의 검출방법
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