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다음을 포함하는 면역세포 조성물을 생산하는 방법:(a) 제1 컨테이너에서 종양 샘플을 배양함,이때 상기 종양 샘플은 상기 제1 컨테이너에서 제1 조성물 내에서 배양되고, 여기서 제1 조성물은 배지, 세럼, 및 500 내지 1500 IU/ml 의 IL-2를 포함하고, 이때 상기 제1 컨테이너는 가스 투과성 컨테이너이거나, 가스 공급 시스템을 포함하는 컨테이너이고, 이때 상기 배양은 13일 내지 15일 동안 수행되고, 이때 상기 배양 동안 제1 첨가 조성물이 1회 또는 2회 이상 상기 제1 컨테이너로 첨가되며, 상기 제1 첨가 조성물은 배지, 세럼, 및 IL-2를 포함하고;(b) 상기 (a)에서 수득한 배양물로부터 제1 면역세포 집단을 수득함; (c) 제2 컨테이너에 제2 조성물 및 제2 면역세포 집단을 파종함, 이때 상기 제2 면역세포 집단은 제1 면역세포 집단으로부터 유래되고, 이때 상기 제2 조성물은 배지, 세럼, 1000 내지 3000 IU/ml의 IL-2, 항-CD3 항체, 및 피더 세포를 포함하고, 이때 상기 제2 컨테이너는 가스 투과성 컨테이너이거나, 가스 공급 시스템을 포함하는 컨테이너임; (d) 제3 면역세포 집단을 생산하기 위해 상기 제2 면역세포 집단을 증폭함, 이때 상기 증폭 동안, 제2 첨가 조성물이 1회 또는 2회 이상 상기 제2 컨테이너로 첨가되고, 상기 제2 첨가 조성물은 배지, 세럼, 및 IL-2를 포함하고, 상기 증폭은 13일 내지 15일 동안 수행됨; 및 (e) 상기 (d)에서 증폭된 증폭물로부터 제3 면역세포 집단을 수득하고 면역세포 조성물을 생산함,이때 상기 제3 면역세포 집단은 상기 제2 면역세포 집단과 비교하여 적어도 2500배 이상의 수의 세포를 가짐
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제1항에 있어서,상기 방법은 종양 샘플을 준비함을 더 포함하고, 이때 상기 종양 샘플을 준비함은 (a) 이전에 수행되는, 방법
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제1항에 있어서,상기 (a)에서, 상기 종양 샘플은 대상으로부터 수득 된 종양 조각으로부터 수득되고, 이때 상기 종양 샘플은 약 1mm2 내지 4mm2 면적의 단면을 갖는, 방법
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제1항에 있어서,(a)에서 12개 내지 24개의 상기 종양 샘플이 배양되는, 방법
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제1항에 있어서,상기 제1 조성물의 상기 세럼의 농도는 5 부피% 이하인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제1 조성물의 상기 세럼의 농도는 약 3 부피%인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제1 조성물의 상기 배지는 CTS-AIM-V 배지인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제1 조성물의 상기 IL-2의 농도는 약 1000IU/ml 인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제1 조성물의 부피는 상기 제1 컨테이너의 최대 허용 가능한 용량의 30% 이하인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제1 컨테이너가 T75 플라스크인 경우, 상기 제1 조성물의 부피는 6ml인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 제1 첨가 조성물은 상기 제1 조성물과 동일한 조성물질 및 조성비를 갖는 조성물인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 제1 첨가 조성물의 IL-2의 농도는 약 1000IU/ml 이고, 상기 제1 첨가 조성물의 세럼의 농도는 약 3 부피% 이고, 상기 제1 첨가 조성물의 배지는 CTS-AIM-V 배지인, 방법
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제1항에 있어서,상기 배양 동안, 상기 제1 첨가 조성물은 2회 이상 상기 제1 컨테이너로 첨가되는, 방법
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제13항에 있어서,상기 배양 동안, 상기 제1 첨가 조성물은 배양 시작일로부터 7, 10, 및 12일째에 상기 제1 컨테이너로 첨가되고, 이때 첨가되는 상기 제1 첨가 조성물의 양은 보충 시점마다 동일한 양인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 면역세포 집단은 상기 제1 면역세포 집단으로부터 수득되는, 방법
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제15항에 있어서,이때 상기 제2 면역세포 집단은 제1 면역세포 집단을 세척함을 포함하는 방법에 의해 수득되는, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 조성물의 배지는 CTS-AIM-V 인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 조성물의 상기 세럼의 농도는 5 부피% 이하인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 조성물의 상기 세럼의 농도는 약 3 부피%인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 조성물의 상기 IL-2의 농도는 약 2000IU/ml 인, 방법
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제1항에 있어서,상기 항-CD3 항체는 OKT3 인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 조성물의 상기 항-CD3 항체의 농도는 10ng/ml 내지 100ng/ml 인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 조성물의 상기 항-CD3 항체의 농도는 약 30ng/ml 인, 방법
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제1항에 있어서,상기 피더세포는 불활성화된 동종이형 말초혈액단핵세포인, 방법
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제1항에 있어서,상기 피더세포는 세포 수가 상기 제2 면역세포집단의 세포 수를 기준으로 약 1:200 (제2 면역세포 집단의 세포 수: 피더세포) 이 되도록 상기 제2 조성물에 포함되는, 방법
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제1항에 있어서,상기 파종함에서, 상기 제2 컨테이너에 파종되는 상기 제2 면역세포 집단의 세포 수는 1E5 내지 10E5인, 방법
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제1항에 있어서,상기 파종함에서, 상기 제2 컨테이너에 파종되는 상기 제2 면역세포 집단의 세포 수는 약 4E5 인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 조성물의 부피는 상기 제2 컨테이너의 최대 허용가능한 용량의 30% 이하인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 컨테이너가 GREX100M 인 경우, 상기 제2 조성물의 부피는 약 20ml인, 방법
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제1항에 있어서,상기 증폭 동안, 면역세포는 상기 제2 컨테이너로부터 제거되거나 외부로부터 추가되지 않는, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 첨가 조성물은 상기 제2 조성물에서 상기 항-CD3 항체 및 상기 피더세포를 제외한 것과 같은 조성물질 및 조성비를 갖는 조성물인, 방법
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제1항에 있어서,상기 제2 첨가 조성물의 IL-2의 농도는 약 2000IU/ml 이고, 상기 제2 첨가 조성물의 세럼의 농도는 약 3 부피% 이고, 상기 제2 첨가 조성물의 배지는 CTS-AIM-V인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 증폭 동안, 상기 제2 첨가 조성물은 2회 이상 제2 컨테이너에 첨가되는, 방법
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제33항에 있어서,첨가되는 상기 제2 첨가 조성물의 양은 보충 시점마다 서로 다른 양인, 방법
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제33항에 있어서, 상기 증폭 동안, 상기 제2 첨가 조성물은 증폭 시작일로부터 4, 6, 8, 및 10일째 상기 제2 컨테이너에 첨가되고, 이때 첨가되는 상기 제2 첨가 조성물의 양은 보충 시점마다 점점 증가하는, 방법
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제33항에 있어서,상기 제2 첨가 조성물은 증폭 시작일로부터 4일째 20ml, 6일째 60ml, 8일째 180ml, 및 10일째 540ml 로 상기 제2 컨테이너에 첨가되는, 방법
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제1항에 있어서,상기 제3 면역세포 집단은 상기 제2 면역세포 집단과 비교하여 적어도 4000배 이상의 수의 세포를 가지는, 방법
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제1항에 있어서, 상기 면역세포 조성물은 상기 제3 면역세포 집단을 포함하는, 방법
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제1항에 있어서,상기 면역세포 조성물은 상기 제3 면역세포 집단으로부터 수득된 제4 면역세포 집단을 포함하는, 방법
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제1항에 있어서,상기 종양 샘플은 유방암, 대장암, 폐암, 위암, 신장암, 난소암, 또는 흑색종을 포함하는 피부암을 가지는 대상의 고형 종양으로부터 유래되는, 방법
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제1항에 있어서, 상기 종양 샘플은 폐암을 가지는 대상의 악성 흉수로부터 유래되는, 방법
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제1항에 있어서,상기 제1 면역세포 집단을 동결보존함; 및 상기 동결보존된 제1 면역세포 집단을 해동함을 더 포함하고,이때, 상기 제1 면역세포 집단을 동결보존함; 및 상기 동결 보존된 제1 면역세포 집단을 해동함은 (b) 상기 (a)에서 수득한 배양물로부터 제1 면역세포 집단을 수득함 이후에 수행되는, 방법
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종양침윤림프구를 포함하는 면역세포 조성물
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제43항에 있어서,상기 면역세포 조성물은 제1항의 방법에 따라 생산된, 면역세포 조성물
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제1항의 방법에 의해 생산된, 종양침윤림프구를 포함하는 면역세포 조성물을 대상에게 투여함을 포함하는, 대상의 종양을 치료하는 방법
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제45항에 있어서,상기 대상은 상기 종양침윤림프구가 유래된 대상인, 대상의 암을 치료하는 방법
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제1항의 방법에 따라 생산된, 종양침윤림프구를 포함하는 면역세포 조성물의, 대상의 암을 치료하기 위한 용도
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제47항에 있어서상기 대상은 상기 종양침윤림프구가 유래된 대상인, 면역세포 조성물의 용도
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