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(a) 수용체 결합 도메인(RBD) 단백질 및 하나 이상의 숙주세포 단백질(host cell protein, HCP)을 포함하는 시료를, 평형 완충액(equilibration buffer)으로 전-평형화(pre-equilibration)된 소수성 상호 반응 크로마토그래피 (Hydrophobic interaction chromatography) 컬럼에 로딩하고, 소수성 상호 반응 크로마토그래피 컬럼을 세척 완충액으로 세척한 후 컬럼에 결합된 단백질을 용출 완충액으로 용출시키는 것을 포함하는 단계;(b) 상기 (a) 단계의 용출된 용출액을 투석 완충액으로 투석(dialysis) 후, 여과(filtration)하는 단계; (c) 상기 (b) 단계의 여과된 용출액을 평형 완충액(equilibration buffer)으로 전-평형화(pre-equilibration)된 수산화 인회석 크로마토그래피(hydroxyapatite, HA) 컬럼에 로딩하고, 수산화 인회석 크로마토그래피 컬럼을 세척 용출액으로 세척한 후 컬럼에 결합된 단백질을 용출 완충액으로 용출시키는 것을 포함하는 단계; (d) 상기 (c) 단계의 용출된 용출액을 여과 후 농축시키는 것을 포함하는 단계; 및(e) 상기 (d) 단계의 농축된 용출액을 겔 여과 크로마토그래피(gel filtration chromatography)로 정제하는 단계;를 포함하는 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 수용체 결합도메인(SARS-CoV-2 RBD)의 정제 방법
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제1항에 있어서,상기 단계 (a) 및 (c)에서 평형 완충액, 세척 완충액 및 용출 완충액은 서로 같거나 다르고 각각 독립적으로 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산나트륨, 시트르산칼륨, 황산암모늄, 인산암모늄 및 염산암모늄으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 것인, 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 수용체 결합도메인의 정제방법
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제1항에 있어서,상기 (a) 단계의 평형 완충액 및 세척 완충액은 서로 같거나 다르고 각각 독립적으로 pH 5
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제1항에 있어서,상기 (a) 단계에서 시료를 컬럼에 로딩하는 속도는 0
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제1항에 있어서,상기 (a) 단계에서 소수성 상호 반응 크로마토그래피 (Hydrophobic interaction chromatography) 컬럼에서의 용출은 1) pH 5
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제1항에 있어서,상기 (a) 단계의 소수성 상호 반응 크로마토그래피 컬럼은 페닐 세파로오스 (Phenyl sepharose) 컬럼인 것인, 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 수용체 결합도메인의 정제방법
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제1항에 있어서,상기 (b) 단계의 투석 완충액은 pH 5
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제1항에 있어서,상기 (b) 단계의 투석은 2 내지 10°C의 온도에서 수행하는 것인, 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 수용체 결합도메인의 정제방법
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제1항에 있어서,상기 (c) 단계의 평형 완충액 및 세척 완충액은 서로 같거나 다르고 각각 독립적으로 pH 5
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제1항에 있어서,상기 (c) 단계에서 컬럼에 로딩하는 속도는 0
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제1항에 있어서,상기 (c) 단계에서 수산화 인회석 크로마토그래피(hydroxyapatite, HA) 컬럼에서의 용출은 100 내지 500 mM 인산칼륨을 포함하는 용출 완충액을 이용하여 농도 구배 방식으로 용출하는 것인, 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 수용체 결합도메인의 정제방법
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제1항에 있어서,상기 용출은 0
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제1항에 있어서,상기 (a) 및 (c) 단계에서 각각의 세척은 2 내지 10 컬럼 부피(CV)의 세척 완충액으로 세척을 수행하는 것인, 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 수용체 결합도메인의 정제방법
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제1항에 있어서,상기 (d) 단계에서 여과 후 0
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제1항에 있어서,상기 (e) 단계에서 완충액으로 PBS(phosphate buffer saline)를 사용하여 등용매용리(Isocratic elution)로 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 수용체 결합도메인을 분리하는 것인, 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 수용체 결합도메인의 정제방법
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