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혈액응고인자 FVIII (F8) (blood coagulation factor VIII)의 F309 위치 및 E1984 위치에 돌연변이를 포함하는, FVIII 변이 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 혈액응고인자 FVIII 넉-인(knock-in) 용 조성물
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제1항에 있어서, 상기 조성물은 AAVS1 유전자 좌위를 표적화하는 가이드 RNA 또는 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 추가적으로 포함하는, 조성물
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제2항에 있어서, 상기 가이드 RNA는 PPP1R12C 유전자의 인트론 1을 표적으로 하는 것인, 조성물
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제2항에 있어서, 상기 가이드 RNA는 프로토스페이서 인접 모티프 (Protospacer adjacent motif, PAM) 서열을 포함하는 것인, 조성물
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제1항에 있어서, RNA-가이드 뉴클레아제(RNA-guided nuclease), 또는 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 추가적으로 포함하는, 조성물
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제5항에 있어서, 상기 RNA-가이드 뉴클레아제는 Cas 폴리펩타이드인, 조성물
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제6항에 있어서, Cas 폴리펩타이드는 Cas9, 또는 Cas12a (Cpf1)인, 조성물
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제1항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 벡터에 포함된 것인, 조성물
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제1항에 있어서, 상기 조성물은 시험관 내(in vitro), 생체 외(ex vivo), 또는 생체 내(in vivo) 교정용인, 조성물
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혈액응고인자 FVIII 변이 단백질을 발현하도록 형질전환된, A형 혈우병(Hemophilia A, HA) 환자의 분리된 체세포로부터 유래한 유도만능 줄기세포(induced pluripotent stem cell, iPSC)에 있어서, 상기 혈액응고인자 FVIII 변이 단백질은 혈액응고인자 FVIII (blood coagulation factor VIII)의 F309 위치 및 E1984 위치에 돌연변이를 포함하는, 유도만능 줄기세포
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제10항의 유도만능 줄기세포로부터 분화된, 혈액응고인자 FVIII 변이 단백질을 발현하는 내피 세포
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제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 조성물, 제10항의 유도만능 줄기세포, 또는 제11항의 내피 세포를 유효성분으로 포함하는, A형 혈우병의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
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A형 혈우병(Hemophilia A, HA) 환자의 분리된 체세포로부터 유래한 유도만능 줄기세포에 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 조성물을 처리하여 혈액응고인자 FVIII 변이 단백질을 발현하도록 형질전환하는 단계를 포함하는, FVIII 변이 단백질을 발현하는 유도만능 줄기세포의 제조방법
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다음 단계를 포함하는 혈액응고인자 FVIII 변이 단백질을 발현하는 내피 세포의 제조 방법:(a) 혈액응고인자 FVIII (blood coagulation factor VIII)의 F309 위치 및 E1984 위치에 돌연변이를 포함하는 FVIII 변이 단백질을 발현하도록 형질 전환된, A형 혈우병(Hemophilia A, HA) 환자의 분리된 체세포로부터 유래한 유도만능 줄기세포(induced pluripotent stem cell, iPSC)를 내피 전구세포(endothelial progenitor cell) 집단으로 분화시키는 단계;(b) 상기 내피 전구세포의 집단 중 CD31, VEGFR2, CD34, VE-Cad, 또는 이들의 조합의 세포 표면 단백질을 발현하는 세포를 분리하는 단계; 및(c) 상기 분리된 세포를 내피 세포로 분화시키는 단계
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제14항에 있어서, 상기 (a) 단계는 상기 형질전환된 유도만능 줄기세포를 Y-27632를 포함하는 배지에서 1 내지 2일간 배양하는 단계를 포함하는 것인, 내피 세포의 제조방법
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제14항에 있어서, 상기 (a) 단계는 상기 형질전환된 유도만능 줄기세포를 CHIR99021를 포함하는 배지에서 1 내지 3일 동안 배양하는 단계를 추가적으로 포함하는 것인, 내피 세포의 제조방법
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제14항에 있어서, 상기 (a) 단계는 상기 형질전환된 유도만능 줄기세포를 BMP4, bFGF, VEGF-A, 또는 이들의 조합을 포함하는 배지에서 1 내지 3일 동안 배양하는 단계를 추가적으로 포함하는 것인, 내피 세포의 제조방법
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제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 배양은 세포외기질을 포함하는 겔로 코팅된 배양용기에서 이루어지는 것인, 내피 세포의 제조방법
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제14항에 있어서, 상기 단계 (b)는 내피 전구세포의 집단 중 CD31, CD34, VE-Cad, 또는 이들의 조합의 세포 표면 단백질을 발현하는 세포를 분리하는 단계인, 유도만능 줄기세포로부터 내피 세포로의 분화 방법
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제14항에 있어서, 상기 (c) 단계는 상기 형질전환된 유도만능 줄기세포를 VEGF-A를 포함하는 배지에서 2 내지 8일 동안 배양하는 단계를 추가적으로 포함하는 것인, 내피세포의 제조방법
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