| 1 |
1
(a1) 수성 매질 중에서, (i) 카테콜기를 갖는 폴리에틸렌이민으로 제1 금 나노입자를 코팅하여 양이온성의 금 나노입자를 제조하고, (ii) 제1 표적 유전자를 포함하는 음이온성의 플라스미드 DNA를 상기 양이온성의 금 나노입자와 정전기적 상호작용을 통하여 반응시켜, 제1 금 나노입자와 제1 표적 유전자와의 복합체(제1 복합체)를 함유하는 분산액을 형성하는 단계,(a2) 수성 매질 중에서, (i') 카테콜기를 갖는 폴리에틸렌이민으로 제2 금 나노입자를 코팅하여 양이온성의 금 나노입자를 제조하고, (ii') 제2 표적 유전자를 포함하는 음이온성의 플라스미드 DNA를 상기 양이온성의 금 나노입자와 정전기적 상호작용을 통하여 반응시켜, 제2 금 나노입자와 제2 표적 유전자와의 복합체(제2 복합체)를 함유하는 분산액을 형성하는 단계,(a3) 수성 매질 중에서, (i'') 카테콜기를 갖는 폴리에틸렌이민으로 제3 금 나노입자를 코팅하여 양이온성의 금 나노입자를 제조하고, (ii'') 제3 표적 유전자를 포함하는 음이온성의 플라스미드 DNA를 상기 양이온성의 금 나노입자와 정전기적 상호작용을 통하여 반응시켜, 제3 금 나노입자와 제3 표적 유전자와의 복합체(제3 복합체)를 함유하는 분산액을 형성하는 단계, 및(b) (b1) 상기 제1 복합체를 함유하는 분산액에 헤파린이 결합된 양친성 중합체를 코팅하여 코어층을 형성하고; (b2) 상기 제2 복합체를 함유하는 분산액을 첨가하여 코어층 상에 제2 복합체를 함유하는 층을 형성한 후, 헤파린이 결합된 양친성 중합체를 코팅하여 중간층을 형성하고; (b3) 상기 제3 복합체를 함유하는 분산액을 첨가하여 중간층 상에 제3 복합체를 함유하는 외곽층을 형성하는 단계를 포함하는, 제3 표적 유전자, 제2 표적 유전자, 및 제1 표적 유전자를 순차적으로 방출하는 3층 구조를 갖는 다중 유전자 전달체의 제조방법
|
| 2 |
2
제1항에 있어서, 상기 제1 금 나노입자의 평균 입자경이 상기 제2 금 나노입자의 평균 입자경에 비하여 크고; 상기 제2 금 나노입자의 평균 입자경이 상기 제3 금 나노입자의 평균 입자경에 비하여 큰 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 3 |
3
제2항에 있어서, 상기 제1 금 나노입자의 평균 입자경이 75∼90 nm이고; 상기 제2 금 나노입자의 평균 입자경이 45∼55 nm이고; 상기 제3 금 나노입자의 평균 입자경이 15∼25 nm인 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 4 |
4
제3항에 있어서, 상기 제1 금 나노입자의 평균 입자경이 77∼85 nm이고; 상기 제2 금 나노입자의 평균 입자경이 47∼53 nm이고; 상기 제3 금 나노입자의 평균 입자경이 19∼21 nm인 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 5 |
5
제2항에 있어서, 상기 제1 금 나노입자의 평균 입자경이 45∼55 nm이고; 상기 제2 금 나노입자의 평균 입자경이 15∼25 nm이고; 상기 제3 금 나노입자의 평균 입자경이 7∼14 nm인 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 6 |
6
제5항에 있어서, 상기 제1 금 나노입자의 평균 입자경이 47∼53 nm이고; 상기 제2 금 나노입자의 평균 입자경이 19∼21 nm이고; 상기 제3 금 나노입자의 평균 입자경이 9∼11 nm인 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 7 |
7
제1항에 있어서, 상기 카테콜기를 갖는 폴리에틸렌이민이 3,4-디히드록시페닐알라닌을 폴리에틸렌이민과 반응시켜 얻어진 것임을 특징으로 하는 제조방법
|
| 8 |
8
제1항에 있어서, 단계(i), 단계(i'), 또는 단계(i'')의 코팅이 제1, 제2, 또는 제3 금속 나노입자 1 mg/ml에 대하여 카테콜기를 갖는 폴리에틸렌이민을 25 ∼ 75 ㎍의 비율로 첨가하고, 교반함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 9 |
9
제1항에 있어서, 단계(ii), 단계(ii'), 또는 단계(ii'')의 반응이 상기 양이온성의 금 나노입자 1 mg/ml에 대하여 상기 표적 유전자를 포함하는 음이온성의 플라스미드 DNA를 5 ∼ 30 ㎍의 비율로 첨가하고, 교반함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 10 |
10
제1항에 있어서, 상기 헤파린이 결합된 양친성 중합체가 헤파린이 결합된 폴리에틸렌글리콜(PEO)-폴리프로필렌글리콜(PPO)-폴리에틸렌글리콜(PEO)의 삼블럭 공중합체인 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 11 |
11
제1항에 있어서, 단계(b1)의 코팅이 제1 금속 나노입자 1 mg/ml에 대하여 헤파린이 결합된 폴리에틸렌글리콜(PEO)-폴리프로필렌글리콜(PPO)-폴리에틸렌글리콜(PEO)의 삼블럭 공중합체를 10 ∼ 20 ㎍의 비율로 첨가하고, 교반함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 12 |
12
제1항에 있어서, 단계(b2)의 코팅이 제2 금속 나노입자 1 mg/ml에 대하여 헤파린이 결합된 폴리에틸렌글리콜(PEO)-폴리프로필렌글리콜(PPO)-폴리에틸렌글리콜(PEO)의 삼블럭 공중합체를 10 ∼ 20 ㎍의 비율로 첨가하고, 교반함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 13 |
13
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 표적 유전자가 ATF4 유전자이고, 상기 제2 표적 유전자가 SP7 유전자이고, 상기 제3 표적 유전자가 RUNX2 유전자인 것을 특징으로 하는 제조방법
|
| 14 |
14
제13항에 따른 제조방법으로 얻어진 3층 구조를 갖는 다중 유전자 전달체로 줄기세포를 형질감염시키는 것을 포함하는, 줄기세포의 골 세포로의 분화방법
|
| 15 |
15
제14항에 있어서, 상기 줄기세포가 인간 중간엽 줄기세포인 것을 특징으로 하는 분화방법
|
| 16 |
16
제14항에 있어서, 상기 형질감염이 상기 3층 구조를 갖는 다중 유전자 전달체를 포함하는 무혈청 배지 중에서 상기 줄기세포를 배양함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 분화방법
|
