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제1 용매 또는 상기 제1 용매와 제2 용매를 함유한 혼합용액을 주입하는 제1 펌프;상기 제1 용매 또는 상기 제1 용매와 상기 제2 용매를 함유한 혼합용액을 주입하는 제2 펌프;상기 제1 펌프와 시료를 주입하는 시료주입기가 연결된 시료 유입밸브;제1 시료 분리컬럼이 연결되며, 상기 제1 시료 분리컬럼에 연결되는 제1 고체상 추출컬럼을 구비한 제1 컬럼밸브;제2 시료 분리컬럼이 연결되며, 상기 제2 시료 분리컬럼에 연결되는 제2 고체상 추출컬럼을 구비한 제2 컬럼밸브; 및상기 제2 펌프가 연결되되, 상기 시료 유입밸브와 상기 제1 컬럼밸브 및 상기 제2 컬럼밸브 사이에 마련되어 상기 제1 시료 분리컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼 중 어느 하나에 상기 시료 유입밸브에서 공급된 시료를 주입하여 시료를 분리 분석하는 동안 동시에 다른 하나의 세척 및 평형화와 시료주입 및 등용매 용출(isocratic elution)이 가능하게 하는 컬럼 선택밸브를 포함하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치
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제1항에 있어서,상기 시료 유입밸브는,상기 시료주입기에 연결되는 시료 유입포트;상기 시료 유입포트에 인접하게 마련되는 시료 배출포트;상기 제1 펌프에 연결되는 제1 펌프 연결포트;상기 제1 펌프 연결포트에 인접하게 마련되며 상기 컬럼 선택밸브에 연결되는 제1 배출포트; 및시료 저장루프의 양단이 각각 연결되는 제1 시료 저장루프 연결포트와 제2 시료 저장루프 연결포트를 포함하며,상기 제1 시료 저장루프 연결포트와 상기 제2 시료 저장루프 연결포트 각각이 상기 시료 유입포트와 상기 시료 배출포트에 연결된 상태에서 시료가 상기 시료 저장루프에 저장되고,상기 제1 시료 저장루프 연결포트와 상기 제2 시료 저장루프 연결포트 각각이 상기 제1 펌프 연결포트와 상기 제1 배출포트에 연결된 상태에서 상기 시료 저장루프에 저장된 시료가 상기 제1 용매와 함께 상기 컬럼 선택밸브에 공급되는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치
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제1항에 있어서,상기 컬럼 선택밸브는,상기 시료 유입밸브에 연결되는 제1 유입포트;상기 제1 컬럼밸브에 연결되는 제1 컬럼밸브 연결포트;상기 제2 컬럼밸브에 연결되는 제2 컬럼밸브 연결포트; 및상기 제2 펌프에 연결되는 제2 펌프 연결포트를 포함하며,상기 시료 유입밸브와 상기 제1 유입포트 및 상기 제1 컬럼밸브 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 대한 평형화와 시료주입 및 등용매 용출이 가능하게 하며,상기 시료 유입밸브와 상기 제1 유입포트 및 상기 제2 컬럼밸브 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화와 시료주입 및 등용매 용출이 가능하게 하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치
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제1항에 있어서,상기 제1 컬럼밸브는,상기 제1 고체상 추출컬럼의 양단에 각각 연결되는 제1 고체상 추출컬럼 연결포트 및 제1 고체상 추출컬럼 경로포트;상기 컬럼 선택밸브에 연결되되, 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트에 선택적으로 연결되는 제1 고체상 추출컬럼 유입포트;상기 제1 시료 분리컬럼에 연결되며, 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트에 연결 또는 연결해제되는 제1 시료 분리컬럼 연결포트; 및상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트에 인접하게 마련되어 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트에 연결 또는 연결해제되는 제2 배출포트를 포함하며,상기 제2 컬럼밸브는,상기 제2 고체상 추출컬럼의 양단에 각각 연결되는 제2 고체상 추출컬럼 연결포트 및 제2 고체상 추출컬럼 경로포트;상기 컬럼 선택밸브에 연결되되, 상기 제2 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트에 선택적으로 연결되는 제2 고체상 추출컬럼 유입포트;상기 제2 시료 분리컬럼에 연결되며, 상기 제2 고체상 추출컬럼 연결포트에 연결 또는 연결해제되는 제2 시료 분리컬럼 연결포트; 및상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트에 인접하게 마련되어 상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트에 연결 또는 연결해제되는 제3 배출포트를 포함하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치
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(A) 시료 유입밸브의 시료 저장루프에 시료를 저장하고, 동시에 제1 컬럼밸브의 제1 고체상 추출컬럼 및 제1 시료 분리컬럼과 제2 컬럼밸브의 제2 고체상 추출컬럼 및 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 수행하는 단계;(B) 상기 시료 저장루프에 저장된 시료를 상기 제1 고체상 추출컬럼에 주입하고 탈염 및 농축하며 동시에 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 지속적으로 수행하는 단계;(C) 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에서 등용매 용출(isocratic elution)을 하며 동시에 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 지속적으로 수행하는 단계;(D) 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에서 기울기 용출(gradient elution)하여 시료를 분리 분석하는 동안 동시에 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화와 시료주입과 탈염 및 농축과 등용매 용출(isocratic elution)을 하는 단계;(E) 상기 제1 시료 분리컬럼에서 시료에 대한 분리 분석을 완료함과 동시에 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에서 등용매 용출을 완료하는 단계;(F) 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에서 기울기 용출하여 시료를 분리 분석하는 동안 동시에 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 대한 세척 및 평형화와 시료주입과 탈염 및 농축과 등용매 용출을 하는 단계;(G) 상기 제2 시료 분리컬럼에서 시료에 대한 분리 분석을 완료함과 동시에 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 제1 시료 분리컬럼에서 등용매 용출을 완료하는 단계; 및(H) 시료에 대한 분리 분석의 횟수 또는 시료의 개수에 따라 반복하여 상기 (D)단계 내지 상기 (G)단계를 순차로 수행하되, 상기 (D)단계에서 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화 이전에 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 세척을 수행하는 단계를 포함하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어 방법
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제5항에 있어서,상기 (A)단계는,(A-1) 상기 시료 유입밸브에 연결된 시료주입기에서 시료를 상기 시료 저장루프에 주입하여 저장하는 단계;(A-2) 상기 시료 유입밸브에 연결된 제1 펌프에서 제1 용매를 컬럼 선택밸브를 경유하여 제1 컬럼밸브의 제1 고체상 추출컬럼 및 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 수행하는 단계; 및(A-3) 상기 컬럼 선택밸브에 연결된 제2 펌프에서 상기 제1 용매를 제2 컬럼밸브의 제2 고체상 추출컬럼 및 제2 시료 분리컬럼에 주입하여 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 수행하는 단계를 포함하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어 방법
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7
제6항에 있어서,상기 시료 유입밸브는,상기 시료주입기에 연결되는 시료 유입포트;상기 시료 유입포트에 인접하게 마련되는 시료 배출포트;상기 제1 펌프에 연결되는 제1 펌프 연결포트;상기 제1 펌프 연결포트에 인접하게 마련되며 상기 컬럼 선택밸브에 연결되는 제1 배출포트; 및상기 시료 저장루프의 양단이 각각 연결되는 제1 시료 저장루프 연결포트와 제2 시료 저장루프 연결포트를 포함하며,상기 (A-1) 단계는,상기 제1 시료 저장루프 연결포트와 상기 제2 시료 저장루프 연결포트 각각이 상기 시료 유입포트와 상기 시료 배출포트에 연결된 상태에서 시료가 상기 시료 저장루프에 저장되는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어 방법
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8
제7항에 있어서,상기 컬럼 선택밸브는,상기 제1 배출포트에 연결되는 제1 유입포트;상기 제1 컬럼밸브에 연결되는 제1 컬럼밸브 연결포트;상기 제2 컬럼밸브에 연결되는 제2 컬럼밸브 연결포트; 및상기 제2 펌프에 연결되는 제2 펌프 연결포트를 포함하며,상기 (A-2) 단계는,상기 제1 펌프 연결포트와 상기 제1 배출포트와 상기 제1 유입포트 및 상기 제1 컬럼밸브 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매를 상기 제1 고체상 추출컬럼과 상기 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 상기 제1 고체상 추출컬럼과 상기 제1 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 수행하고,상기 (A-3) 단계는,상기 제2 펌프 연결포트와 상기 제2 컬럼밸브 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제2 펌프에서 상기 제1 용매를 상기 제2 고체상 추출컬럼과 상기 제2 시료 분리컬럼에 주입하여 상기 제2 고체상 추출컬럼과 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 수행하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제8항에 있어서,상기 제1 컬럼밸브는,상기 제1 고체상 추출컬럼의 양단에 각각 연결되는 제1 고체상 추출컬럼 연결포트 및 제1 고체상 추출컬럼 경로포트;상기 제1 컬럼밸브 연결포트에 연결되되, 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트에 선택적으로 연결되는 제1 고체상 추출컬럼 유입포트;상기 제1 시료 분리컬럼에 연결되며, 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트에 연결 또는 연결해제되는 제1 시료 분리컬럼 연결포트; 및상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트에 인접하게 마련되어 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트에 연결 또는 연결해제되는 제2 배출포트를 포함하며,상기 제2 컬럼밸브는,상기 제2 고체상 추출컬럼의 양단에 각각 연결되는 제2 고체상 추출컬럼 연결포트 및 제2 고체상 추출컬럼 경로포트;상기 제2 컬럼밸브 연결포트에 연결되되, 상기 제2 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트에 선택적으로 연결되는 제2 고체상 추출컬럼 유입포트;상기 제2 시료 분리컬럼에 연결되며, 상기 제2 고체상 추출컬럼 연결포트에 연결 또는 연결해제되는 제2 시료 분리컬럼 연결포트; 및상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트에 인접하게 마련되어 상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트에 연결 또는 연결해제되는 제3 배출포트를 포함하며,상기 (B) 단계는,(B-1) 상기 제1 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트가 연결되고 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트와 상기 제2 배출포트가 연결된 상태에서 상기 시료 저장루프에 저장된 시료가 상기 제1 펌프에서 공급되는 상기 제1 용매와 함께 상기 제1 고체상 추출컬럼에 주입되고 탈염 및 농축되는 단계; 및(B-2) 상기 제2 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트가 연결되고 상기 제2 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제2 시료 분리컬럼 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제2 펌프에서 상기 제1 용매를 상기 제2 고체상 추출컬럼과 상기 제2 시료 분리컬럼에 공급하여 상기 제2 고체상 추출컬럼과 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 지속적으로 수행하는 단계를 포함하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제9항에 있어서,상기 (C) 단계는,상기 제1 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트가 연결되고 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제1 시료 분리컬럼 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매와 제2 용매를 함유한 혼합용액을 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 등용매 용출하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제10항에 있어서,상기 (D)단계는,(D-1) 상기 제2 펌프에서 상기 제2 용매를 시간 경과에 따라 증가시킨 상기 혼합용액을 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 기울기 용출(gradient elution)하여 시료를 분리 분석하며 동시에 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매를 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 주입하여 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 지속적으로 수행하고 상기 시료 저장루프에 시료를 저장하는 단계;(D-2) 상기 제1 시료 분리컬럼에서 시료를 분리 분석하는 동안 동시에 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매를 상기 시료 저장루프에 주입하여 상기 시료 저장루프에 저장된 시료를 상기 제2 고체상 추출컬럼에 주입하고 탈염 및 농축하는 단계; 및(D-3) 상기 제1 시료 분리컬럼에서 시료를 분리 분석하는 동안 동시에 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매와 상기 제2 용매를 함유한 혼합용액을 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 주입하여 등용매 용출을 하는 단계를 포함하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제11항에 있어서,상기 (D-1)단계는,상기 제1 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트를 연결하고 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제1 시료 분리컬럼 연결포트를 연결한 상태에서 상기 제2 펌프에서 상기 제2 용매를 시간 경과에 따라 증가시킨 상기 혼합용액을 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 기울기 용출(gradient elution)하여 시료를 분리 분석하며, 상기 제1 펌프 연결포트와 상기 제1 배출포트와 상기 제1 유입포트 및 상기 제2 컬럼밸브 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매를 상기 제2 고체상 추출컬럼과 상기 제2 시료 분리컬럼에 주입하여 평형화를 수행하고,상기 (D-2)단계는,상기 제2 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제2 고체상 추출컬럼 연결포트가 연결되고 상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트와 상기 제3 배출포트가 연결된 상태에서 상기 시료 저장루프에 저장된 시료가 상기 제1 펌프에서 공급되는 상기 제1 용매와 함께 상기 제2 고체상 추출컬럼에 주입되고 탈염 및 농축되며,상기 (D-3)단계는,상기 제2 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트가 연결되고 상기 제2 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제2 시료 분리컬럼 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매와 상기 제2 용매를 함유한 상기 혼합용액을 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 주입하여 등용매 용출하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제12항에 있어서,상기 (H)단계에서 반복하여 상기 (D)단계 내지 상기 (G)단계를 순차로 수행하는 경우에, 상기 (D-1) 단계에서 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 평형화 이전에 상기 제1 펌프 연결포트와 상기 제1 배출포트와 상기 제1 유입포트 및 상기 제2 컬럼밸브 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매 20%와 상기 제2 용매 80%를 함유한 상기 혼합용액을 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 주입하여 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 대한 세척을 수행하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제11항에 있어서,상기 (E) 단계는,상기 제1 시료 분리컬럼에서 시료에 대한 분리 분석이 종료되는 시점과 상기 제2 시료 분리컬럼에서 첫번째 펩티드가 용출되기 직전의 시점이 일치되는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제14항에 있어서,상기 (F)단계는,(F-1) 상기 제2 펌프에서 상기 제2 용매를 시간 경과에 따라 증가시킨 상기 혼합용액을 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 공급하여 기울기 용출(gradient elution)하여 시료를 분리 분석하며 동시에 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매 20%와 상기 제2 용매 80%를 함유한 상기 혼합용액을 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 대한 세척을 수행한 후 상기 제1 용매를 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 공급하여 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 대한 평형화를 지속적으로 수행하고 상기 시료 저장루프에 시료를 저장하는 단계;(F-2) 상기 제2 시료 분리컬럼에서 시료를 분리 분석하는 동안 동시에 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매를 상기 시료 저장루프에 공급하여 상기 시료 저장루프에 저장된 시료를 상기 제1 고체상 추출컬럼에 주입하고 탈염 및 농축하는 단계; 및(F-3) 상기 제2 시료 분리컬럼에서 시료를 분리 분석하는 동안 동시에 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매와 상기 제2 용매를 함유한 혼합용액을 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 공급하여 등용매 용출을 하는 단계를 포함하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제15항에 있어서,상기 (F-1)단계는,상기 제2 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제2 고체상 추출컬럼 경로포트를 연결하고 상기 제2 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제2 시료 분리컬럼 연결포트를 연결한 상태에서 상기 제2 펌프에서 상기 제2 용매를 시간 경과에 따라 증가시킨 상기 혼합용액을 상기 제2 고체상 추출컬럼 및 상기 제2 시료 분리컬럼에 공급하여 기울기 용출(gradient elution)하여 시료를 분리 분석하며, 상기 제1 펌프 연결포트와 상기 제1 배출포트와 상기 제1 유입포트 및 상기 제1 컬럼밸브 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매 20%와 상기 제2 용매 80%를 함유한 상기 혼합용액을 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 세척한 후 상기 제1 용매를 상기 제1 고체상 추출컬럼과 상기 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 평형화를 수행하고,상기 (F-2)단계는,상기 제1 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트가 연결되고 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트와 상기 제2 배출포트가 연결된 상태에서 상기 시료 저장루프에 저장된 시료가 상기 제1 펌프에서 공급되는 상기 제1 용매와 함께 상기 제1 고체상 추출컬럼에 주입되고 탈염 및 농축되며,상기 (F-3)단계는,상기 제1 고체상 추출컬럼 유입포트와 상기 제1 고체상 추출컬럼 경로포트가 연결되고 상기 제1 고체상 추출컬럼 연결포트와 상기 제1 시료 분리컬럼 연결포트가 연결된 상태에서 상기 제1 펌프에서 상기 제1 용매와 상기 제2 용매를 함유한 상기 혼합용액을 상기 제1 고체상 추출컬럼 및 상기 제1 시료 분리컬럼에 주입하여 등용매 용출하는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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제14항에 있어서,상기 (G)단계는,상기 제2 시료 분리컬럼에서 시료에 대한 분리 분석이 종료되는 시점과 상기 제1 시료 분리컬럼에서 첫번째 펩티드가 용출되기 직전의 시점이 일치되는 상호 독립적 이중 온라인 액체크로마토그래피 장치의 제어방법
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