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가) 점액 단백질을 포함하는 점성 시료를 염기성 용액으로 처리하여 용해된 시료를 얻는 단계;나) 가)의 용해된 시료에 포함되어 있는 불순물을 분획분자량 기반 정제 컬럼으로 제거하여 점액 단백질을 선별하는 단계;다) 선별된 점액 단백질을 가수분해하여 점액 단백질 가수분해물을 얻는 단계;라) 점액 단백질 가수분해물을 중화하는 단계;마) 라)의 중화 단계 이후 점액 단백질 가수분해물을 원심분리하여 중성 단당류 포함 시료를 얻는 단계;바) 마) 단계에서 얻은 중성 단당류 포함 시료에 PMP (1-phenyl-3-methyl-5- pyrazolone)를 반응시켜 PMP 표지된 중성 단당류 포함 시료를 얻고 중화하는 단계;사) 중화된 PMP 표지된 중성 단당류 포함 시료를 액체-액체 추출 (Liquid Liquid Extraction, LLE)하여 상층액을 얻는 단계; 및아) 사)에서 얻은 상층액을 농축하는 단계;를 포함하는 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류 동시 정량을 위한 시료 제조방법
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청구항 1에 있어서,상기 나) 단계의 분획분자량 기반 정제 컬럼은 스핀 컬럼인, 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류 동시 정량을 위한 시료 제조방법
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청구항 1에 있어서,상기 사) 단계의 액체-액체 추출은 중화된 PMP 표지된 중성 단당류 포함 시료에 CHCl3 (Chloroform)를 가하여 수행함을 특징으로 하는, 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류 동시 정량을 위한 시료 제조방법
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a) PMP (1-phenyl-3-methyl-5- pyrazolone) 표지된 중성 단당류 포함 시료를 고체상 추출 카트리지에 로딩하는 단계;b) TFA (trifluoroacetic acid) 함유 용액을 이용하여 상기 a)의 고체상 추출 카트리지로부터 크로마토그래피용 PMP 표지된 중성 단당류 시료를 용출하는 단계;c) 고체상 추출법으로 용출된 크로마토그래피용 PMP 표지된 중성 단당류 시료를 정제 및 농축하고, 과량의 PMP를 제거하는 단계; 및d) c)에서 얻은 정제 및 농축된 PMP 표지된 중성 단당류 시료를 LC/MRM-MS로 정성 및 정량 분석하는 단계;를 포함하는 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류의 동시 정성 및 정량 분석방법
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청구항 4에 있어서,PMP 표지된 중성 단당류 포함 시료는 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 것인, 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류의 동시 정성 및 정량 분석방법
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청구항 4에 있어서,TFA (trifluoroacetic acid) 함유 용액은 TFA 함유 ACN (acetonitrile)인 것을 특징으로 하는, 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류의 동시 정성 및 정량 분석방법
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청구항 4에 있어서,d) 단계의 LC/MRM-MS는ㄱ) UHPLC로 PMP 표지된 중성 단당류 포함 시료로부터 중성 단당류를 분리하는 단계; 및ㄴ) 분리된 PMP 표지된 중성 단당류에 대하여 사중극자 질량분석기 (QqQ-MS)를 이용하여 특이적 탄뎀 이온 모니터링을 통해 도출된 크로마토그램의 면적 값을 기반으로 정량분석을 수행하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류의 동시 정성 및 정량 분석방법
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청구항 7에 있어서,상기 ㄴ) 단계는 중성 단당류 표준품 시료와 함께 분석을 수행하여 얻은 표준품과 샘플간의 크로마토그램의 면적 값을 비교하여 정량값 도출함을 특징으로 하는, 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류의 동시 정성 및 정량 분석방법
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청구항 4에 있어서,상기 중성 단당류는 만노스, 글루코스, 갈락토스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민, 퓨코스, 람노스, 아라비노스 및 자일로스 중 선택된 1종 이상인, 점액 단백질에서 유래한 다양한 농도와 다양한 종류의 중성 단당류의 동시 정성 및 정량 분석방법
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청구항 4에 있어서,상기 중성 단당류는 각각 0
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