| 1 |
1
dNTP, Cas 단백질, 검출가능한 리포터 분자, 프라이머 세트 및 crRNA를 포함하는 PCR과 CRISPR 시스템을 이용한 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트로,상기 프라이머 세트 및 crRNA는,(a) 서열번호 1의 정방향 프라이머와 서열번호 2의 역방향 프라이머로 이루어진 프라이머세트와 서열번호 3의 crRNA; (b) 서열번호 4의 정방향 프라이머와 서열번호 5의 역방향 프라이머로 이루어진 프라이머 세트와 서열번호 6의 crRNA; 및(c) 서열번호 7의 정방향 프라이머와 서열번호 10의 역방향 프라이머로 이루어진 프라이머 세트와 서열번호 11의 crRNA;로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 프라이머 세트 및 crRNA인 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 2 |
2
제1항에 있어서,상기 위생 지표 미생물은 대장균, 대장균군 및 총균으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 3 |
3
제2항에 있어서, 상기 위생 지표 미생물이 총균인 경우, 정방향 프라이머는 서열번호 7의 정방향 프라이머의 5' 부위에 PAM 서열을 추가적으로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 4 |
4
제3항에 있어서,상기 정방향 프라이머는 서열번호 8의 프라이머인 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 5 |
5
제3항에 있어서, 상기 정방향 프라이머는, 프라이머의 5' 부위에 4 내지 20 뉴클레오타이드를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 6 |
6
제5항에 있어서,서열번호 9의 프라이머인 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 7 |
7
제1항에 있어서,상기 dNTP는 dATP, dCTP 및 dGTP; 및dUTP 및 dTTP로 이루어진 군 중 어느 하나 이상을 포함하고,이때 dUTP와 dTTP의 비율은 0:100 내지 100:0인 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 8 |
8
제7항에 있어서,상기 키트에 UDG(uracil DNA glycosylase)를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 9 |
9
제1항에 있어서,상기 Cas 단백질은 Cas12a 단백질인 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 10 |
10
제1항에 있어서,상기 리포터 분자는 길이가 5 내지 9-mer의 ssDNA인 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 11 |
11
제9항에 있어서,상기 Cas12a와 crRNA의 농도 비율은 1:0
|
| 12 |
12
제1항에 있어서, 상기 키트에서 5 내지 20%의 trehalose를 추가적으로 포함하여 동결건조 한 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트
|
| 13 |
13
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 키트를 이용한 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출 방법으로, (a) 상기 프라이머 세트로 PCR을 수행하는 단계 ; (b) 상기 crRNA를 이용한 CRISPR 시스템에 적용하는 단계; 및 (c) 표적하는 핵산 분자가 있는 경우 리포터 분자에 의해 검출하는 단계를 포함하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출 방법
|
| 14 |
14
제14항에 있어서, 상기 (a) 단계의 PCR은 추가적인 핵산 추출 없이 진행되는 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출 방법
|
| 15 |
15
제14항에 있어서, 상기 (a) 단계의 PCR은 29 내지 34 cycle을 수행하는 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출 방법
|
| 16 |
16
제13항에 있어서, 상기 (c) 단계에서 검출시, 민감도가 100 내지 10-2 cells/ul인 것을 특징으로 하는 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출 방법
|
| 17 |
17
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 위생 지표 미생물 또는 이의 핵산분자 검출용 키트를 이용한 현장용 분자 진단 방법
|
