| 1 |
1
i) 전분화능 줄기세포를 분화배지에서 배양하여 상피 전구세포로 분화시키는 단계; 및 ii) 상기 분화시킨 상피 전구세포를 성숙화 배지 1에서 배양하고 이어서 그 배양한 세포를 성숙화 배지 2에서 배양하여 세포를 안정적으로 증식하고 성숙시키는 단계를 포함하는, 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드 제조방법
|
| 2 |
2
제1항에 있어서, 상기 전분화능 줄기세포는 배아줄기세포 또는 유도만능 줄기세포인, 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드 제조방법
|
| 3 |
3
제1항에 있어서, 상기 i) 단계의 분화배지는 GMEM(Glasgow Modified Essential Medium), KSR(knock-out serum replacement), 피루브산나트륨(sodium pyruvate), 비필수아미노산(NEAA, Non-Essential Amino Acid) 및 베타-메르캅토에탄올(β-mercaptoethanol)을 포함하는, 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드 제조방법
|
| 4 |
4
제1항에 있어서, 상기 i) 단계에서 전분화능 줄기세포가 스페로이드(spheroid)를 형성하면 GFR(growth factor reduced) 매트리겔(matrigel)을 처리하는, 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드 제조방법
|
| 5 |
5
제4항에 있어서, 상기 i) 단계에서 GFR(growth factor reduced) 매트리겔(matrigel)을 처리하는 단계 후, TGF-β(transforming growth factor-beta) 억제제 및 BMP-4(Bone morphogenetic protein-4)를 처리하여 비신경 외배엽으로 분화시킨 후, BMP 억제제(BMP inhibitor) 및 FGF-2를 처리하여 상피 전구세포로 분화시키는, 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드 제조방법
|
| 6 |
6
제1항에 있어서, 상기 i) 단계의 배양은 5일 내지 10일 동안 수행되는 것인, 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드 제조방법
|
| 7 |
7
제1항에 있어서, 상기 ii) 단계의 배양은 상피 전구세포를 GFR(growth factor reduced) 매트리겔(matrigel)과 1:0
|
| 8 |
8
제1항에 있어서, 상기 ii) 단계의 성숙화 배지 1은 DMEM/F-12, N2 supplement, Glutamax, FBS 및 Rho 카이네즈 억제제(Rho kinase inhibitor)를 포함하고, 상기 ii) 단계의 성숙화 배지 2는 FBS 및 Rho 카이네즈 억제제를 포함하지 않으며, DMEM/F-12, N2 supplement 및 Glutamax를 포함하는 것인, 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드 제조방법
|
| 9 |
9
제1항에 있어서, 상기 ii) 단계의 성숙화 배지 1에서의 배양은 1일 내지 3일 동안 수행되고, 성숙화 배지 2에서의 배양은 6일 내지 12일 동안 수행되는 것인, 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드 제조방법
|
| 10 |
10
제1항의 제조방법으로 제조된 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드
|
| 11 |
11
Krt1, Krt5, Krt10, Krt14, Filaggrin, Loricrin, Involucrin, Sox9, CD34, p75 및 Itga6에서 선택되는 하나 이상의 유전자를 발현하는 것을 특징으로 하는 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드
|
| 12 |
12
제1항의 제조방법으로 제조된 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드이거나, 또는Krt1, Krt5, Krt10, Krt14, Filaggrin, Loricrin, Involucrin, Sox9, CD34, p75 및 Itga6에서 선택되는 하나 이상의 유전자를 발현하는 것을 특징으로 하는 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드에서 유래한 것을 특징으로 하는 생체외 피부 질환을 모사하는 피부 모델
|
| 13 |
13
제10항 또는 제11항의 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드를 GFR(growth factor reduced) 매트리겔(matrigel)과 1:5 내지 1:15 비율로 혼합하여 증식용 배지에서 계대배양하는 단계를 포함하는, 상피 오가노이드의 증식방법
|
| 14 |
14
제13항에 있어서, 상기 계대배양은 2일차까지는 Rho 카이네즈 억제제(Rho kinase inhibitor) 존재하에 증식용 배지에서 배양하며, 이후부터는 Rho 카이네즈 억제제가 존재하지 않는 증식용 배지에서 배양하고, 상기 증식용 배지는 DMEM/F-12, Hepes, Glutamax, B27 supplement, N-Acetylcysteine-1, Heparin, Noggin, R-spondin 1, acidic FGF1 및 Forskolin를 포함하는 것인, 상피 오가노이드의 증식방법
|
| 15 |
15
제13항에 있어서,상기 상피 오가노이드는 동결보존이 가능하고, 해동 후 계대배양시 동결 전과 동일하게 Krt5, Krt1, Krt14, Sox9 및 Involucrin에서 선택되는 하나 이상의 유전자 발현이 유지되는 것을 특징으로 하는 것인, 상피 오가노이드의 증식방법
|
| 16 |
16
제10항 또는 제11항의 전분화능 줄기세포 유래 상피 오가노이드에 피부 질환 치료 후보 약물을 접촉시키는 단계; 및 상기 피부 질환 치료 후보 약물이 처리된 오가노이드의 유전적 변이를, 상기 피부 질환 치료 약물이 처리되지 않은 대조군과 비교하는 단계를 포함하는, 생체 외에서 피부 질환 치료 후보 약물을 스크리닝하는 방법
|
