| 1 |
1
a) 분리된 세포에 하기의 i) 또는 iii) 중 선택되는 어느 하나 이상을 도입하여 세포에서의 BCL11B 유전자 발현을 억제하는 단계: i) BCL11B shRNA(Short hairpin RNA),ii) BCL11B siRNA(Short interfering RNA), 또는iii) CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9-gRNA-BCL11B;b) 상기 a) 단계의 세포를 사이토카인 및 성장인자를 포함하는 배지에서 배양하여 NK(Natural killer) 세포로 세포전환 시키는 단계;를 포함하는, directly reprogrammed natural killer NK(drNK) 세포 제조방법
|
| 2 |
2
제1항에 있어서, 상기 a) 단계의 분리된 세포는 NK 세포를 제외한 체세포인 것인, 제조방법
|
| 3 |
3
제2항에 있어서, 상기 체세포는 혈액 세포(Blood cell) 및 섬유아 세포(Fibroblast)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법
|
| 4 |
4
제1항에 있어서, 상기 shRNA의 타겟 센스 서열(Target sense sequence)은 서열번호 1 내지 7로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법
|
| 5 |
5
제1항에 있어서, 상기 siRNA의 타겟 센스 서열(Target sense sequence)은 서열번호 8 내지 11로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법
|
| 6 |
6
제1항에 있어서, 상기 CRISPR/Cas9-gRNA-BCL11B는 a) 단계 또는 b) 단계 중 선택되는 어느 하나 이상의 단계에서 처리되는 것인, 제조방법
|
| 7 |
7
제1항에 있어서, 상기 gRNA는 서열번호 12 내지 13으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법
|
| 8 |
8
제1항에 있어서, 상기 b)의 성장인자는 EGF(Epidermal growth factor), PDGF-AA(Platelet-derived growth factor-AA), IGF-1(Insulin-like growth factor 1), TGF-β(Transforming growth factor-β), FGF(Fibroblast growth factor), SCF(Stem cell factor) 및 FLT3L(FMS-like tyrosine kinase ligand)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법
|
| 9 |
9
제1항에 있어서, 상기 b)의 사이토카인은 IL(Interleukin)-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-11, IL-15, IL-21, BMP4(Bone morphogenetic protein 4), 액티빈 A(Acivin A), 노치 리간드(Notch ligand), G-CSF(Granulocyte-colony stimulating factor) 및 SDF-1(Stromal cell-derived factor-1)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법
|
| 10 |
10
제1항에 있어서, 상기 b)의 성장인자 및 사이토카인은 IL-2, IL-15, IL-7, SCF 및 FLT3L로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법
|
| 11 |
11
제1항에 있어서, 상기 b)의 배지는 GSK3β(Glycogen synthase kinase 3β) 저해제(Inhibitor), PDK1(3-phosphoinositide-dependent kinase 1) 저해제 및 AHR(Aryl hydrocarbon receptor) 저해제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 것인, 제조방법
|
| 12 |
12
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 drNK 세포
|
| 13 |
13
제12항에 있어서, 상기 세포는 CD56+, CD3- 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 발현하는 것인, 세포
|
| 14 |
14
제1항의 방법에서 상기 a) 또는 b) 중 선택되는 어느 하나 이상의 단계에 CD19-CAR, MSLN-CAR 및 HER2-CAR로 이루어지는 군으로부터 선택되는 CAR 유전자를 추가로 도입하는 것을 포함하는 것인, CAR-drNK 세포 제조방법
|
| 15 |
15
제14항에 있어서, 상기 CAR 유전자는 BCL11B 넉아웃 염기서열에 넉인(Knock-in)하여 도입하는 것인, 제조방법
|
| 16 |
16
제14항에 있어서, 상기 CAR 유전자는 i) CD8 리더(Leader), CD19 scFv, CD8 힌지(Hinge), CD8 막 관통 도메인 및 Fc-γ(Gamma) 수용체를 포함하는 CAR 유전자; ii) CD8 리더, MSLN(Mesothelin) scFv, CD8 힌지, CD8 막 관통 도메인, CD28 세포내 도메인, CD3ζ 및 IRES를 포함하는 CAR 유전자; 및 iii) CD8 리더, HER2(Human epidermal growth factor receptor 2) scFv, CD8 힌지, CD8 막 관통 도메인, CD28 세포내 도메인, CD3ζ 및 IRES를 포함하는 CAR 유전자;로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 제조방법
|
| 17 |
17
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 CAR-drNK 세포
|
| 18 |
18
제17항에 있어서, 상기 세포는 CD56+, CD3- 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 발현하는 것인, 세포
|
| 19 |
19
제1항 내지 제11항 및 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 세포를 유효성분으로 포함하는, 암 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물
|
| 20 |
20
제1항 내지 제11항 및 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 세포를 유효성분으로 포함하는, 암 예방 또는 치료용 약학 조성물
|
| 21 |
21
제19항에 있어서, 상기 암은 CD19, MSLN 또는 HER2으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현과 연관된 암인 것인, 조성물
|
| 22 |
22
제21항에 있어서, 상기 CD19, MSLN 또는 HER2으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현과 연관된 암은 림프종, 백혈병, 골수종, 중피종, 자궁암, 두경부암, 식도암, 활막육종, 신장암, 이행세포암종, 감상선암, 생식세포종, 담도암/담관암, 유두양 장액성 선암, 대장암, 간암, 폐암, 췌장암, 교모세포종, 결장암, 난소암, 유방암, 전립선암, 흑색종, 근육종, 갑상선암, 골육종, 융모암, 위암, 신경교종, 연조직 육종, 신경내분비종양, 뇌하수체종양, 희소돌기아교세포종, 위장관기질 종양, 쓸개암, 소장암, 고립성 섬유종, 흉선암, 및 방광암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 조성물
|
| 23 |
23
제1항 내지 제11항 및 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 세포를 유효성분으로 포함하는, 감염성 질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물
|
| 24 |
24
제1항 내지 제11항 및 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 세포를 유효성분으로 포함하는, 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
|
| 25 |
25
제23항에 있어서, 상기 감염성 질환은 바이러스, 세균 및 곰팡이로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상에 의해 발생하는 것인, 조성물
|
| 26 |
26
제25항에 있어서, 상기 바이러스는 RNA 바이러스 및 DNA 바이러스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 조성물
|
| 27 |
27
제25항에 있어서, 상기 바이러스는 Epstein-Barr(엡스타인바) 바이러스(EBV), Hepatitis 바이러스, Human immunodeficiency(인간 면역결핍) 바이러스(HIV), Influenza(인플루엔자) 바이러스, Papilloma(유두종) 바이러스, SARS(Severe acute respiratory syndrome) (사스) 바이러스, SARS corona(사스 코로나) 바이러스 및 SARS-CoV-2 바이러스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 조성물
|
| 28 |
28
제25항에 있어서, 상기 세균은 그람음성 세균 및 그람양성 세균으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 조성물
|
| 29 |
29
제25항에 있어서, 상기 세균은 Escherichia(에스케리키아) 및 Streptococcus(스트렙토코커스)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 조성물
|
| 30 |
30
제25항에 있어서, 상기 곰팡이는 Aspergillus(누룩곰팡이), Candida(칸디다), Absidia(활털곰팡이), Mucor(털곰팡이) 및 Rhizopus(거미줄곰팡이) 속으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 조성물
|
