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서열번호 1로 기재되는 염기서열을 포함하는 전방향 프라이머(forward primer)와 서열번호 2로 기재되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머(reverse primer)를 포함하는 프라이머 세트, 및 서열번호 3으로 기재되는 염기서열로 이루어지는 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브;서열번호 4로 기재되는 염기서열을 포함하는 전방향 프라이머(forward primer)와 서열번호 5로 기재되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머(reverse primer)를 포함하는 프라이머 세트, 및 서열번호 6으로 기재되는 염기서열로 이루어지는 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브; 및서열번호 7로 기재되는 염기서열을 포함하는 전방향 프라이머(forward primer)와 서열번호 8로 기재되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머(reverse primer)를 포함하는 프라이머 세트, 및 서열번호 9로 기재되는 염기서열로 이루어지는 푸말라바이러스 검출용 TaqMan 프로브; 를 포함하고,TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응(TaqMan multiplex real-time PCR)에 사용되는 것을 특징으로 하는,한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스 검출용 프라이머 및 TaqMan 프로브 세트
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제1항에 있어서,상기 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브, 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브 및 푸말라바이러스 검출용 TaqMan 프로브에서 염기서열의 5' 말단에 형광발색제(fluorescent reporter dye)가 표지되고 3' 말단에 소광제(quencher)가 표지되는 것을 특징으로 하는,한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스 검출용 프라이머 및 TaqMan 프로브 세트
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3 |
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제2항에 있어서,상기 형광발색제는 FAM(carboxyfluorescein), JOE(2,7-dimethoxy-4,5-dichloro-6-carboxyfluoroscein), VIC, HEX(2',4',5',7'-tetrachloro-6-carboxy-4,7-dichlorofluorescein), Cy3(indocarbocyanine-3), Cy5(indocarbocyanine-5), 및 Rox(6-Carboxy-X-rhodamine)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스 검출용 프라이머 및 TaqMan 프로브 세트
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제2항에 있어서,상기 소광제는 NFQ(nonfluorescent quencher), MGB(minor-groove binding), BHQ-1(Black Hole Quencher 1), BHQ-2(Black Hole Quencher 2), BHQ-3(Black Hole Quencher 3), TAMRA(5-Carboxytetramethylrhodamine), DDQ1(deep dark Quencher 1), 및 DDQ2(deep dark Quencher 2)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는,한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스 검출용 프라이머 및 TaqMan 프로브 세트
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제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,상기 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브는 상기 서열번호 3의 염기서열의 5'-말단에 형광발색제인 FAM(carboxyfluorescein)이 표지되고 3'-말단에 소광제인 NFQ(nonfluorescent quencher) 또는 MGB(minor-groove binding)가 표지되는 것을 특징으로 하는, 한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스 검출용 프라이머 및 TaqMan 프로브 세트
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제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,상기 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브는 상기 서열번호 6의 염기서열의 5'-말단에 형광발색제인 Rox(6-Carboxy-X-rhodamine)가 표지되고 3'-말단에 소광제인 NFQ(nonfluorescent quencher) 또는 MGB(minor-groove binding)가 표지되는 것을 특징으로 하는, 한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스 검출용 프라이머 및 TaqMan 프로브 세트
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제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,상기 푸말라바이러스 검출용 TaqMan 프로브는 상기 서열번호 9의 염기서열의 5'-말단에 형광발색제인 Cy5(indocarbocyanine-5)가 표지되고 3'-말단에 소광제인 NFQ(nonfluorescent quencher) 또는 MGB(minor-groove binding)가 표지되는 것을 특징으로 하는, 한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스 검출용 프라이머 및 TaqMan 프로브 세트
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서열번호 1과 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 한탄바이러스 검출용 프라이머 세트 및 서열번호 3의 염기서열을 포함하는 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브; 서열번호 4와 서열번호 5의 염기서열을 포함하는 서울바이러스 검출용 프라이머 세트 및 서열번호 6의 염기서열을 포함하는 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브; 및서열번호 7과 서열번호 8의 염기서열을 포함하는 푸말라바이러스 검출용 프라이머 세트 및 서열번호 9의 염기서열을 포함하는 푸말라바이러스 검출용 TaqMan 프로브; 를 이용하여 TaqMan 다중 실시간 중합효소연쇄반응(TaqMan multiplex real-time PCR)을 수행하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스의 분석방법
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제16항에 있어서,(a) 시료부터 전장 RNA를 분리하는 단계; (b) 분리된 전장 RNA로부터 cDNA를 합성하는 단계; (c) 합성된 cDNA에 서열번호 1과 서열번호 2의 염기서열로 구성되는 한탄바이러스 검출용 프라이머 세트 및 서열번호 3의 염기서열로 구성된 한탄바이러스 검출용 TaqMan 프로브, 서열번호 4와 서열번호 5의 염기서열로 구성되는 서울바이러스 검출용 프라이머 세트 및 서열번호 6의 염기서열로 구성된 서울바이러스 검출용 TaqMan 프로브, 및서열번호 7과 서열번호 8의 염기서열로 구성되는 푸말라바이러스 검출용 프라이머 세트 및 서열번호 9의 염기서열로 구성된 푸말라바이러스 검출용 TaqMan 프로브를 이용하여 TaqMan 실시간 중합효소연쇄반응법(TaqMan real-time PCR)을 수행하는 단계; 및(d) 한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스를 검출 및 정량하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는,한탄바이러스, 서울바이러스 및 푸말라바이러스의 분석방법
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