| 1 |
1
다음 단계를 포함하는 표적 핵산 검출 방법 :(a) 시료로부터 표적 핵산을 분리하는 단계;(b) 내부 프라이머(inner primer) 및 외부 프라이머(outer primer)를 이용하여 LAMP(Loop mediated isothermal amplification) 반응으로 표적 유전자를 증폭하는 단계;(c) 고형 지지체에 고정된 포획 핵산(capture nucleic acid)과 상기 (b) 단계에서 증폭된 유전자 산물을 혼성화시키는 단계; 및(d) 고형 지지체에서 표적 핵산 유무를 확인하는 단계
|
| 2 |
2
제1항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 내부 프라이머의 농도는 LAMP 반응의 전체 시약 대비 1000 : 4 내지 1000 : 14이고, 상기 (b) 단계에서 외부 프라이머의 농도는 LAMP 반응의 전체 시약 대비 1000 : 0
|
| 3 |
3
제1항에 있어서, 상기 (c) 단계의 고형 지지체는 니트로셀룰로오스(NC), 나일론, 폴리술폰, 폴리 에테르술폰 및 PVDF(Polyvinylidene fluoride) 중에서 선택된 어느 하나이고, 상기 고형 지지체는 금속염으로 처리되었으며, 상기 금속염은 NaCl, KCl, MgCl2 및 CaCl2 중에서 선택된 어느 하나이고,상기 금속염의 처리는 0
|
| 4 |
4
제1항에 있어서, 상기 (c) 단계의 진행 시간은 10분 내지 30분인 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 5 |
5
제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 내부 프라이머에 비오틴 표지가 된 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 6 |
6
제1항에 있어서,상기 (c) 단계의 포획 핵산은 상기 (b) 단계에서 증폭된 유전자 산물이 가지는 단일 가닥에 상보적인 단일 가닥인 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 7 |
7
제6항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 증폭된 유전자 산물이 가지는 단일 가닥은 루프 부위이고, 상기 (c) 단계의 포획 핵산은 정방향 루프 포획 핵산(Forward Loop capture nucleic acid) 또는 역방향 루프 포획 핵산(Backward Loop capture nucleic acid)인 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 8 |
8
제1항에 있어서,상기 표적 핵산은 살모넬라균 유래 유전자인 표적 핵산 검출 방법
|
| 9 |
9
제8항에 있어서, 상기 살모넬라균 유래 유전자가 stn 유전자인 경우, 상기 (a) 단계의 내부 프라이머 중 정방향 내부 프라이머(forward inner primer)는 서열번호 3, 역방향 내부 프라이머(backward inner primer)는 서열번호 4이고, 상기 내부 프라이머의 5' 부위에 비오틴 표지된 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 10 |
10
제8항에 있어서, 상기 살모넬라균 유래 유전자가 stn 유전자인 경우,상기 (c) 단계의 포획 핵산은 정방향 루프 포획 핵산인 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 11 |
11
제10항에 있어서, 상기 정방향 루프 포획 핵산은 서열번호 5인 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 12 |
12
제1항에 있어서,상기 표적 핵산은 스타필로코커스 아레우스(Staphylococcus aureus) 유래 유전자인 표적 핵산 검출 방법
|
| 13 |
13
제12항에 있어서, 상기 스타필로코커스 아레우스(Staphylococcus aureus) 유래 유전자가 femA 유전자인 경우, 상기 (a) 단계의 내부 프라이머 중 정방향 내부 프라이머는 서열번호 9, 역방향 내부 프라이머는 서열번호 10이고, 상기 내부 프라이머의 5' 부위에 비오틴 표지된 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 14 |
14
제12항에 있어서, 상기 스타필로코커스 아레우스(Staphylococcus aureus) 유래 유전자가 femA 유전자인 경우, 상기 (c) 단계의 포획 핵산은 역방향 루프 포획 핵산인 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 15 |
15
제14항에 있어서, 상기 역방향 루프 포획 핵산은 서열번호 12인 것을 특징으로 하는 표적 핵산 검출 방법
|
| 16 |
16
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 표적 핵산 검출 방법을 이용한 다중 표적 핵산 검출 방법
|
| 17 |
17
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 표적 핵산 검출 방법을 이용한 현장용 분자 진단 방법
|
| 18 |
18
서열번호 3의 정방향 내부 프라이머, 서열번호 4의 역방향 내부 프라이머, 외부 프라이머 및 서열번호 5의 포획 핵산이 고정된 고형 지지체를 포함하는 살모넬라균 검출용 키트
|
| 19 |
19
서열번호 9의 정방향 내부 프라이머, 서열번호 10의 역방향 내부 프라이머, 외부 프라이머 및 서열번호 12의 포획 핵산이 고정된 고형 지지체를 포함하는 스타필로코커스 아레우스(Staphylococcus aureus) 검출용 키트
|
