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(a) 전분화능 줄기세포 유래 3차원 장관 오가노이드를 단일세포 또는 작은 세포 덩어리로 분리하는 단계; 및(b) 상기 단일세포 또는 작은 세포 덩어리를 WNT/R-스폰딘 활성제, 프로스타글란딘 신호전달경로의 활성제, 및 수용체 타이로신 키나제 리간드를 포함하는 배양 배지에서 2차원 배양하는 단계; 를 포함하는, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, WNT/R-스폰딘 활성제는 R-스폰딘 1, R-스폰딘 2, R-스폰딘 3, R-스폰딘 4, 및 R-스폰딘 모방물질로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 프로스타글란딘 신호전달경로의 활성제는 아라키돈산(AA), 프로스타글란딘 E2(PGE2), 프로스타글란딘 G2(PGG2), 프로스타글란딘 F2(PGF2), 프로스타글란딘 H2(PGH2) 및 프로스타글란딘 D2(PGD2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 수용체 타이로신 키나제 리간드는 상피 성장 인자(EGF), 형질전환 성장인자-알파(TGF-알파), 기본 섬유아세포 성장 인자(bFGF), 뇌-유래된 신경영양 인자(BDNF), 간세포 성장 인자(HGF) 및 각질세포 성장 인자(KGF)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 배양 배지는 B27, N-Acetyl-L-cysteine(NAC), 니코틴아미드, Gastrin, TGF-베타 억제제, Wnt 신호전달경로 활성화제, BMP 억제제 및 p38 저해제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함하는, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제5항에 있어서, TGF-베타 억제제는 A-83-01, SB-431542, SB-505124, SB-525334, SD-208, LY-36494 및 SJN-251로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제5항에 있어서, Wnt 신호전달경로 활성화제는 Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9a, Wnt9b, Wnt10a, Wnt10b, Wnt11 및 Wnt16로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제5항에 있어서, BMP 억제제는 노긴(Noggin), Dorsomorphin, DMH1, 또는 LDN-193189인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제5항에 있어서, p38 저해제는 SB202190, SB203580, SB239063, SB706504, BIR796, JX401, EO1428, RWJ67657, SCIO469, VX745, TAK715, ML3403, DBM1285 및 PH797804로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 배양 배지는 배양 초기 ROCK 억제제, Notch 활성제 또는 이들 모두를 더 포함하는 것인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 배양 배지는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium), Ham's F12, DMEM/F12, DMEM/F12 및 Advanced DMEM/F12로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 장 줄기세포 집합체는 LGR5, CD44, SOX9, LRIG1, LYZ, AXIN2, CTNNB 및 MKI67으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 마커에 대하여 증진된 발현 수준을 나타내는 것인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 장 줄기세포 집합체는 LDHB, EIF3E, SOX9 및 SHH로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 마커가 발현되는 것인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 장 줄기세포 집합체는 집합체 총 세포에 대하여 S phase 세포, LGR5+ 줄기세포 및 초기 Enterocyte를 포함한 세포가 80% 이상인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 전분화능 줄기세포 유래 3차원 장관 오가노이드는(a) 전분화능 줄기세포를 Nodal, Activin A, Activin B, BMP4, Wnt3a, CHIR99021 및 bFGF로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 배지에서 배양하여 definitive endoderm으로 분화시키는 단계;(b) definitive endoderm를 BIO(6-브로모인디루'-3'-옥심), SB216763(3-(2,4-디클로로페닐)-4-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-1H-피롤-2,5-디온), GSK-3β 억제제 VII(α,4-디브로모아세토페논), L803-mts(Myr-N-GKEAPPAPPQSpP-NH2) 및 CHIR99021로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 GSK3 억제제; 및 섬유 아세포 성장 인자(Fibroblast growth factor, FGF)를 포함한 배지에서 배양하여 3차원 Hindgut 스페로이드로 분화시키는 단계; 및(c) 3차원 Hindgut 스페로이드를 BMP 억제제; WNT/R-스폰딘 활성제; 수용체 타이로신 키나제 리간드; 및 IL-2, IL-22, IL-6, IL-1β, IL-11, EGF, OSM, NRG-1, IL-10 및 콜리베린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 인자를 포함하는 배지에서 배양하여 3차원 장관 오가노이드를 제조하는 단계; 를 거쳐 제조된 것인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제15항에 있어서, 상기 (c) 단계에서 배지는 ROCK 억제제, B27, N-Acetyl-L-cysteine(NAC), N2, 니코틴아미드, 가스트린, IGF-1, heregulin-1β, bFGF, A-83-01 및 SB202190로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 더 포함하는 것인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항에 있어서, 단일세포 또는 작은 세포 덩어리로 분리하는 단계는 EDTA, 트립신 또는 이들 모두로 처리되어 단일세포 또는 작은 세포 덩어리로 해리되는 것인, 장 줄기세포 집합체의 배양 방법
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제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 따른 배양 방법으로 제조된 장 줄기세포 집합체
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(a) 전분화능 줄기세포 유래 3차원 장관 오가노이드를 단일세포 또는 작은 세포 덩어리로 분리하는 단계;(b) 상기 단일세포 또는 작은 세포 덩어리를 WNT/R-스폰딘 활성제, 프로스타글란딘 신호전달경로의 활성제, 및 수용체 타이로신 키나제 리간드를 포함하는 배양 배지에서 2차원 배양하여 장 줄기세포 집합체를 제조하는 단계; 및(c) 상기 장 줄기세포 집합체를 프로스타글란딘 신호전달경로의 활성제, 수용체 타이로신 키나제 리간드, p38 저해제, WNT/R-스폰딘 활성제 및 니코틴아미드를 포함하는 분화 배지에서 기체-액체 계면배양법으로 배양하는 단계; 를 포함하는, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항에 있어서, 기체-액체 계면배양법은 세포외 기질이 코팅된 트랜스웰 하에 장 줄기세포를 배양하는 것인, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항에 있어서, WNT/R-스폰딘 활성제는 R-스폰딘 1, R-스폰딘 2, R-스폰딘 3, R-스폰딘 4, 및 R-스폰딘 모방물질로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항에 있어서, 프로스타글란딘 신호전달경로의 활성제는 아라키돈산(AA), 프로스타글란딘 E2(PGE2), 프로스타글란딘 G2(PGG2), 프로스타글란딘 F2(PGF2), 프로스타글란딘 H2(PGH2) 및 프로스타글란딘 D2(PGD2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항에 있어서, 수용체 타이로신 키나제 리간드는 상피 성장 인자(EGF), 형질전환 성장인자-알파(TGF-알파), 기본 섬유아세포 성장 인자(bFGF), 뇌-유래된 신경영양 인자(BDNF), 간세포 성장 인자(HGF) 및 각질세포 성장 인자(KGF)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항에 있어서, p38 저해제는 SB202190, SB203580, SB239063, SB706504, BIR796, JX401, EO1428, RWJ67657, SCIO469, VX745, TAK715, ML3403, DBM1285 및 PH797804로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항에 있어서, 상기 장 상피세포는 VIL1, ECAD, FABP1, KRT20, LCT, LYZ 및 MUC2로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 마커에 대하여 증진된 발현 수준을 나타내는 것인, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항에 있어서, 상기 장 상피세포는 AKR1B15, DHRS11, GALNT4, GALNT5, DHRS3, RDH10, AADAC, NR1I2, SULTE1, DOUX2, FABP1, SLC6A20, SLC43A1 및 CLDN3로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 마커에 대하여 증진된 발현 수준을 나타내는 것인, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항에 있어서, 상기 장 상피세포는 소장세포, 점액 분비세포, 호르몬 분비세포 및 파네스 세포를 포함하는 것인, 장 상피세포의 제조 방법
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제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제조 방법으로 제조된 장 상피세포
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제28항에 따른 장 상피세포를 포함하는 장 상피세포 모델
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제29항에 있어서, 상기 장 상피세포 모델은 crypt-villus 구조를 가지는 것인 장 상피세포 모델
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(a) 제29항에 따른 장 상피세포 모델에 박테리아 또는 바이러스를 감염시키는 단계;(b) 감염된 장 상피세포 모델에 약물을 처리하는 단계; 및 (c) 약물 처리에 따른 반응을 확인하는 단계; 를 포함하는 약물 스크리닝 방법
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(a) 제29항에 따른 장 상피세포 모델에 약물을 처리하는 단계; 및(b) 상기 (a) 단계의 장 상피세포 모델에서 약물의 흡수도 또는 생체 이용률을 평가하는 단계를 포함하는 약물 평가 방법
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제29항에 따른 장 상피세포 모델에 박테리아 또는 바이러스를 감염시키는 단계를 포함하는 질환 모델링을 위한 장 상피세포 모델 제공 방법
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제18항에 따른 장 줄기세포 집합체를 포함하는 조직 치료제
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제18항에 따른 장 줄기세포 집합체를 포함하는 장 이식 보조용 약학 조성물
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