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표적 유전자의 프로모터의 일부와 상동인 프로모터 특이 상동 부위, 상기 프로모터 특이 상동 부위와 작동가능하게 연결된 마커 유전자, 및 상기 마커 유전자의 하류에 연결되고 표적 유전자의 적어도 일부와 상동인 유전자 특이 상동 부위를 포함하는, 표적 유전자를 결손하기 위한 카세트
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청구항 1에 있어서, 상기 프로모터 특이 상동 부위는 상기 표적 유전자의 프로모터의 3'-말단으로부터 5'-말단 방향으로 40 내지 150 개의 뉴클레오티드와 상동인 것인 카세트
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청구항 1에 있어서, 상기 마커 유전자는 항생제 저항성 유전자 또는 형광 단백질 유전자인 것인 카세트
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청구항 1에 있어서, 상기 유전자 특이 상동 부위는 상기 표적 유전자의 40 내지 500 개의 뉴클레오티드와 상동인 것인 카세트
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표적 유전자의 프로모터의 일부와 상동인 프로모터 특이 상동 부위, 상기 프로모터 특이 상동 부위와 작동가능하게 연결된 마커 유전자, 및 상기 마커 유전자의 하류에 연결되고 표적 유전자의 적어도 일부와 상동인 유전자 특이 상동 부위를 포함하는, 표적 유전자를 결손하기 위한 카세트를 제조하는 단계;상기 카세트를 숙주 세포에 도입하는 단계; 및상기 카세트가 도입된 숙주 세포 중 표적 유전자가 결손된 세포를 확인하는 단계;를 포함하는, 표적 유전자가 결손된 세포를 제조하는 방법
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청구항 5에 있어서, 상기 제조 단계는, 마커 유전자를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 주형으로 하고, 상기 마커 유전자의 5’말단부위의 서열 및 프로모터 특이 상동 부위의 서열을 포함하는 정방향 프라이머, 및 상기 마커 유전자의 3’말단부위의 서열 및 유전자 특이 상동 부위의 서열을 포함하는 역방향 프라이머를 이용하여 증폭하여 증폭 산물을 얻는 것인 방법
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청구항 5에 있어서, 숙주 세포는 효모인 것인 방법
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청구항 5에 있어서, 숙주 세포에 도입된 상기 카세트는 상동 재조합에 의해 숙주 세포의 염색체 내로 통합되는 것인 방법
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청구항 5에 있어서, 상기 마커 유전자는 항생제 저항성 유전자인 것인 방법
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청구항 9에 있어서, 상기 확인 단계는 상기 항생제가 포함된 배지에서 증식하는 세포를 확인하는 것인 방법
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청구항 5에 있어서, 상기 마커 유전자는 형광 단백질 유전자인 것인 방법
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청구항 11에 있어서, 상기 확인 단계는 상기 형광을 발현하는 세포를 확인하는 것인 방법
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표적 유전자의 프로모터의 일부와 상동인 프로모터 특이 상동 부위, 상기 상동 부위와 작동가능하게 연결된 형광 단백질 유전자, 및 상기 형광 단백질 유전자의 하류에 연결되고 표적 유전자의 적어도 일부와 상동인 유전자 특이 상동 부위를 포함하는, 표적 유전자를 결손하기 위한 카세트를 제조하는 단계;상기 카세트를 숙주 세포에 도입하는 단계; 및상기 카세트가 도입된 숙주 세포 중 형광을 발현하는 세포를 분리하는 단계;를 포함하는, 표적 유전자가 결손된 세포를 분리하는 방법
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청구항 13에 있어서, 상기 분리 단계는 유세포 분석법에 의해 수행되는 것인 방법
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