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인지장애 질환 검출용 단백질 다이머 및 이의 제조방법(Synthetic protein dimer for detecting hippocampus-dependent cognitive deficits and preparation thereof)

  • 기술번호 : KST2016019928
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 인지장애 질환 검출용 단백질 다이머 및 이의 제조방법에 관한 것으로 P, S, L, S`, P`를 포함하고, 상기 P의 아미노산 서열과 P`의 아미노산 서열이 평행 또는 비평행하게 배치되는 입체구조를 갖는 하기 [화학식 1]로 표시됨으로써, 평행 또는 비평행의 입체구조에 따른 독성의 차이 및 다이머 이상의 올리고머 구조에 따른 독성을 알 수 있으며 인지장애 질환을 진단하는데 이용할 수 있는 항체의 개발에 이용될 수 있을 뿐만 아니라 위의 다이머를 인식할 수 있는 물질의 개발에 이용 가능하며, 이에는 형광물질, 흡광물질, 발광물질, 핵의학 등에 이용할 수 있는 물질 등도 포함된다. 또한, 이를 이용하여 핵의학적 뇌영상으로 인지장애 질환을 진단할 수 있는 타겟물질을 제조할 수 있다. [화학식 1] P-S-L-S`-P`
Int. CL C07K 14/47 (2006.01.01) C07K 16/18 (2006.01.01) G01N 33/68 (2006.01.01)
CPC C07K 14/47(2013.01) C07K 14/47(2013.01) C07K 14/47(2013.01) C07K 14/47(2013.01) C07K 14/47(2013.01) C07K 14/47(2013.01) C07K 14/47(2013.01) C07K 14/47(2013.01)
출원번호/일자 1020160154954 (2016.11.21)
출원인 한국과학기술연구원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2016-0137925 (2016.12.02) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 취하
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자 10-2014-0086642 (2014.07.10)
관련 출원번호 1020140086642
심사청구여부/일자 N
심사청구항수 40

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김영수 대한민국 서울특별시 성북구
2 김혜연 대한민국 서울특별시 성북구
3 이세진 대한민국 서울특별시 성북구
4 김현진 대한민국 서울특별시 성북구
5 최지원 대한민국 서울특별시 성북구
6 김동진 대한민국 서울특별시 성북구
7 배애님 대한민국 서울특별시 성북구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인충현 대한민국 서울특별시 서초구 동산로 **, *층(양재동, 베델회관)

최종권리자

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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [분할출원]특허출원서
[Divisional Application] Patent Application		 2016.11.21 수리 (Accepted) 1-1-2016-1134205-96
2 협의요구서
Request for Consultation		 2016.12.23 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0929291-49
3 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2017.02.22 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0183793-58
4 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2017.02.22 수리 (Accepted) 1-1-2017-0183760-52
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
하기 [화학식 1]로 표시되는 단백질 다이머:[화학식 1] P-S-L-S`-P`상기 화학식 1에서 상기 P 및 상기 P`는 단백질 또는 그 절편이고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지거나(parallel) 또는 상기 P의 최외각에서 상기 L 방향과 상기 L에서 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(anti-parallel),상기 S 및 상기 S`는 서로 동일하거나 상이하고 각각 독립적으로 단일 결합이거나 또는 스페이서이며,상기 L은 링커이다
2 2
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-1]로 표현되고,[화학식 1-1]NPC-S-L-S`-CP`N상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 CP`N는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
3 3
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 S 및 상기 S`는 각각 독립적으로 단일 결합이거나 또는 아미노산 서열을 갖는 스페이서이고,상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-1a]로 표현되며,[화학식 1-1a]NPC-NSC-L-CS`N-CP`N상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NSC는 상기 S가 상기 P에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 CS`N는 상기 S`가 상기 L에서 상기 P` 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 CP`N는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
4 4
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-2]로 표현되고,[화학식 1-2]CPN-S-L-S`-NP`C상기 CPN는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
5 5
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 S 및 상기 S`는 각각 독립적으로 단일 결합이거나 또는 아미노산 서열을 갖는 스페이서이며,상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-2a]로 표현되고,[화학식 1-2a]CPN-CSN-L-NS`C-NP`C상기 CPN는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 CSN는 상기 S가 상기 P에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 NS`C는 상기 S`가 상기 L에서 상기 P` 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
6 6
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P의 최외각에서 상기 L 방향과 상기 L에서 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 가지며(anti-parallel),상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-3]로 표현되고,[화학식 1-3]NPC-S-L-S`-NP`C상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
7 7
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하며, 상기 P의 최외각에서 상기 L 방향과 상기 L에서 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 가지며(anti-parallel),상기 S 및 상기 S`는 각각 독립적으로 단일 결합이거나 또는 아미노산 서열을 갖는 스페이서이며,상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-3a]로 표현되고,[화학식 1-3a]NPC-NSC-L-NS`C-NP`C상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NSC는 상기 S가 상기 P에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 NS`C는 상기 S`가 상기 L에서 상기 P` 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
8 8
제1항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 응집체 형성이 가능한 단백질 또는 그 절편인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
9 9
제1항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 1 내지 42의 베타 아밀로이드, 타우 단백질, 시누클레인, 프리온 단백질로 구성된 군에서 선택되는 단백질 또는 그 절편인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
10 10
제1항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 각각 독립적으로 베타 아밀로이드 40, 베타 아밀로이드 42 및 이들 중 어느 하나의 절편 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
11 11
제1항에 있어서, 상기 절편은 베타 아밀로이드 40 또는 베타 아밀로이드 42의 아미노산 서열 중에 응집체 형성이 가능한 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
12 12
제1항에 있어서, 상기 스페이서는 폴리에틸렌글리콜 또는 펩타이드인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
13 13
제1항에 있어서, 상기 스페이서는 5 내지 30개의 아미노산 길이를 갖는 펩타이드인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
14 14
제1항에 있어서, 상기 스페이서는 GGGSGGGS의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
15 15
제1항에 있어서, 상기 L은 2개의 아민기 또는 2개의 카르복실기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
16 16
제1항에 있어서, 상기 L은 기질과 결합이 가능한 관능기를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
17 17
제16항에 있어서, 상기 기질은 왕 레진(Wang's resin), 메리필드 레진(Merrifield resin), 또는 이들의 유도체인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
18 18
제1항에 있어서, 상기 L은 알킨(R-≡)과 아자이드(R`-N3)의 Husgen Cycloaddition 반응 결합물이고,상기 R 및 R`는 또는 중에서 같거나 상이한(n=0 내지 5의 정수, m=1 내지 3의 정수, * 표시는 아자이드기 또는 알킨기인 결합부위) 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
19 19
제18항에 있어서, 상기 아자이드는 H2NCH(N3)COOH또는 H2NCH(CH2CH2CH2N3)COOH이고, 상기 알킨은 H2NCH(C≡CH)COOH 또는 H2NCH(CH2CH2CH2C≡CH)COOH인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
20 20
제18항에 있어서, 상기 L은 트리아졸을 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
21 21
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-1]로 표현되고,[화학식 1-1]NPC-S-L-S`-CP`N상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 CP`N는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 L은 2개의 아민기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
22 22
제19항에 있어서, 상기 L은 카르복실기를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
23 23
제19항에 있어서, 상기 L은 라이신인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
24 24
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 S 및 상기 S`는 각각 독립적으로 단일 결합이거나 또는 아미노산 서열을 갖는 스페이서이며,상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-1a]로 표현되고,[화학식 1-1a]NPC-NSC-L-CS`N-CP`N상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NSC는 상기 S가 상기 P에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 CS`N는 상기 S`가 상기 L에서 상기 P` 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 CP`N는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 L은 2개의 아민기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
25 25
제24항에 있어서, 상기 L은 카르복실기를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
26 26
제24항에 있어서, 상기 L은 라이신인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
27 27
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-2]로 표현되고,[화학식 1-2]CPN-S-L-S`-NP`C상기 CPN는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 L은 2개의 카르복실기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
28 28
제27항에 있어서, 상기 L은 아민기를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
29 29
제27항에 있어서, 상기 L은 글루탐산인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
30 30
제1항에 있어서, 상기 S와 S`는 동일하거나 상이하고,상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 S 및 상기 S`는 각각 독립적으로 단일 결합이거나 또는 아미노산 서열을 갖는 스페이서이며,상기 화학식 1의 단백질 다이머는 하기 [화학식 1-2a]로 표현되고,[화학식 1-2a]CPN-CSN-L-NS`C-NP`C상기 CPN는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 CSN는 상기 S가 상기 P에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 NS`C는 상기 S`가 상기 L에서 상기 P` 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고,상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내며,상기 L은 2개의 카르복실기를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
31 31
제30항에 있어서, 상기 L은 아민기를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
32 32
제30항에 있어서, 상기 L은 글루탐산인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머
33 33
제1항에 있어서, 상기 L은 기질과 결합이 가능한 관능기를 추가로 포함하고,상기 관능기는 아민기, 카르복실기, 에스테르기 또는 하이드록실기 중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 단백질 다이머
34 34
제1항에 있어서, 상기 단백질 다이머는 하기 [서열번호 1]의 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 단백질 다이머:[서열번호 1]NH2-DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV-GGGSGGGS-εK-SGGGSGGG-VVGGVMLGIIAGKNSGVDEAFFVLKQHHVEYGSDHRFEAD-NH2
35 35
제1항에 있어서, 상기 단백질 다이머는 하기 [서열번호 2]의 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 단백질 다이머:[서열번호 2]COOH-VVGGVMLGIIAGKNSGVDEAFFVLKQHHVEYGSDHRFEAD-SGGGSGGG-K-ε-SGGGSGGG-VVGGVMLGIIAGKNSGVDEAFFVLKQHHVEYGSDHRFEAD-NH2
36 36
제1항의 단백질 다이머를 포함하는 인지 장애 질환 검출용 항원
37 37
제36항의 항원과 특이적으로 결합하는 항체
38 38
제1항의 단백질 다이머와 상호작용을 하는 항체를 포함하여 상기 단백질 다이머를 인식하는 물질
39 39
제38항의 물질을 포함하는 핵의학적 뇌영상 진단용 타겟 물질
40 40
제39항의 핵의학적 뇌영상 진단용 타겟 물질을 투입한 후 인지장애 질환에 특이적으로 증가된 병변을 핵의학영상촬영장치(SPECT)로 촬영하는 단계를 포함하는 핵의학적 뇌영상 측정방법
41 41
제38항의 단백질 다이머를 인식하는 물질을 개발하기 위한 리간드 분자
42 42
제41항에 있어서, 상기 리간드 분자는 제1항의 단백질 다이머인 것을 특징으로 하는 리간드 분자
43 43
하기 [화학식 1-1]로 표시되며, [화학식 1-1]NPC-S-L-S`-CP`N상기 S와 S`는 단일 결합이고, 상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지고(parallel),상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 CP`N는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내는 단백질 다이머를 제조하는 방법으로서,(A) 2개의 아민기 및 관능기를 포함하는 L의 상기 관능기와 기질을 결합하는 단계;(B) 상기 L에 포함된 각각의 아민기에 상기 P 및 상기 P`를 결합하는 단계; 및(C) 상기 L과 기질을 절단하여 단백질 다이머를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
44 44
하기 [화학식 1-1a]로 표시되며, [화학식 1-1a]NPC-NSC-L-CS`N-CP`N상기 S와 S`는 비펩티드 스페이서 또는 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 갖는 스페이서이고, 상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 NSC는 상기 S가 상기 P에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내며, 상기 CS`N는 상기 S`가 상기 L에서 상기 P` 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 CP`N는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내는 단백질 다이머를 제조하는 방법으로서,(A`) 2개의 아민기 및 관능기를 포함하는 L의 상기 관능기와 기질을 결합하는 단계;(B`) 상기 L에 포함된 각각의 아민기에 상기 S 및 상기 S`를 결합하는 단계;(C`) 상기 S 및 상기 S`각각에 상기 P 및 상기 P`를 결합하는 단계; 및(D`) 상기 L과 기질을 절단하여 단백질 다이머를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
45 45
제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 베타 아밀로이드 40, 베타 아밀로이드 42 및 이들 중 어느 하나의 절편 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
46 46
제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 관능기는 카르복실기인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
47 47
하기 [화학식 1-2]로 표시되며, [화학식 1-2]CPN-S-L-S`-NP`C상기 S와 S`는 단일 결합이고, 상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 CPN는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내는 단백질 다이머를 제조하는 방법으로서,(A``) 기질에 상기 P 및 상기 P`를 2개 이상으로 결합시키는 단계;(B``) 상기 2개 이상의 상기 P 및 상기 P`중에서 인접한 상기 P 및 상기 P`와 2개의 카르복실기를 포함하는 하나의 L을 결합하는 단계; 및(C``) 상기 P 및 상기 P`와 기질을 절단하여 단백질 다이머를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
48 48
하기 [화학식 1-2a]로 표시되며, [화학식 1-2a]CPN-CSN-L-NS`C-NP`C상기 S와 S`는 비펩티드 스페이서 또는 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 갖는 스페이서이고, 상기 P 및 상기 P`는 상기 L에서 상기 P 및 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일한 아미노산 서열을 가지며(parallel),상기 CPN는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 CSN는 상기 S가 상기 P에서 상기 L 방향으로 보았을 때 C 말단에서 N 말단의 방향인 것을 나타내며, 상기 NS`C는 상기 S`가 상기 L에서 상기 P` 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내는 단백질 다이머를 제조하는 방법으로서,(A```) 기질에 상기 P 및 상기 P`를 2개 이상으로 결합시키는 단계;(B```) 상기 2개 이상의 상기 P 및 상기 P` 중에서 인접한 2개의 상기 P 및 상기 P`와 상기 S 및 상기 S`를 결합하는 단계;(C```) 상기 S 및 상기 S`과 상기 2개의 카르복실기를 포함하는 하나의 L을 결합하는 단계; 및(D```) 상기 P 및 상기 P`와 기질을 절단하여 단백질 다이머를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
49 49
제47항 또는 제48항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 베타 아밀로이드 40, 베타 아밀로이드 42 및 이들 중 어느 하나의 절편 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
50 50
제49항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 1 내지 42개 아미노산 중에서 선택된 개수의 아미노산을 순차적으로 결합시켜 형성된 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
51 51
하기 [화학식 1-3]으로 표시되며, [화학식 1-3]NPC-S-L-S`-NP`C상기 S와 S`는 단일 결합이고, 상기 P의 최외각에서 상기 L 방향과 상기 L에서 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 가지며(anti-parallel),상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내는 단백질 다이머를 제조하는 방법으로서,(a) 기질에 상기 P`를 결합하는 단계;(b) 상기 P`와 상기 2개의 아민기를 포함하는 L을 결합하는 단계;(c) 상기 L에 함유된 2개의 아민기 중 하나의 아민기에 보호기를 부착하는 단계;(d) 상기 L에 함유된 다른 아민기에 상기 P를 결합하는 단계; (e) 상기 (c)단계에서 부착된 보호기를 제거하는 단계; 및(f) 상기 기질과 상기 P`를 절단하여 단백질 다이머를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
52 52
하기 [화학식 1-3a]로 표시되며, [화학식 1-3a]NPC-NSC-L-NS`C-NP`C상기 S와 S`는 비펩티드 스페이서 또는 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 갖는 스페이서이고, 상기 P의 최외각에서 상기 L 방향과 상기 L에서 상기 P`의 최외각 방향으로 서로 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 가지며(anti-parallel),상기 NPC는 상기 P가 최외각에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 NSC는 상기 S가 상기 P에서 상기 L 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내며, 상기 NS`C는 상기 S`가 상기 L에서 상기 P` 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내고, 상기 NP`C는 상기 P`가 상기 L에서 최외각 방향으로 보았을 때 N 말단에서 C 말단의 방향인 것을 나타내는 단백질 다이머를 제조하는 방법으로서,(a`) 기질에 상기 P`를 결합하는 단계;(b`) 상기 P`와 상기 S`를 결합하는 단계;(c`) 상기 S`와 2개의 아민기를 포함하는 상기 L을 결합하는 단계;(d`) 상기 L에 함유된 2개의 아민기 중 하나의 아민기에 보호기를 부착하는 단계;(e`) 상기 L에 함유된 다른 아민기에 상기 S를 결합하는 단계;(f`) 상기 S에 상기 P를 결합하는 단계; (g`) 상기 (d`)단계에서 부착된 보호기를 제거하는 단계; 및(h`) 상기 기질과 상기 P`를 절단하여 단백질 다이머를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
53 53
제51항 또는 제52항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 베타 아밀로이드 40, 베타 아밀로이드 42 및 이들 중 어느 하나의 절편 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
54 54
제53항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 1 내지 42개 아미노산 중에서 선택된 개수의 아미노산을 순차적으로 결합시켜 형성된 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
55 55
제51항 또는 제52항에 있어서, 상기 보호기가 부착되는 아민기는 사이드 체인(side chain)으로 화학결합된 아민기인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
56 56
제51항 또는 제52항에 있어서, 상기 보호기는 9-플루오레닐메톡시카보닐(Fmoc), 4-메틸트리틸 (Mtt) 또는 t-부톡시카보닐(Boc)인 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
57 57
제2항, 제4항 및 제6항에서 표시된 [화학식 1-1], [화학식 1-2] 및 [화학식 1-3] 중에서 선택되며, S와 S`는 단일 결합이고, L은 트리아졸을 포함하는 단백질 다이머를 제조하는 방법에 있어서, (Ⅰ) 상기 P`와 말단이 아자이드기인 화합물을 결합하는 단계;(Ⅱ) 상기 P와 말단이 알킨기인 화합물을 결합하는 단계; 및(Ⅲ) 상기 (Ⅰ)단계의 아자이드기와 (Ⅱ)단계의 알킨기의 반응으로 L이 형성되어 단백질 다이머를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
58 58
제3항, 제5항 및 제7항에서 표시된 [화학식 1-1a], [화학식 1-2a] 및 [화학식 1-3a] 중에서 선택되며, S와 S`는 비펩티드 스페이서 또는 동일하거나 상이한 아미노산 서열을 갖는 스페이서이고, L은 트리아졸을 포함하는 단백질 다이머를 제조하는 방법에 있어서, (Ⅰ`) 상기 S`와 말단이 아자이드기인 화합물을 결합하는 단계;(Ⅱ`) 상기 S`와 P`를 결합하는 단계;(Ⅲ`) 상기 S와 말단이 알킨기인 화합물을 결합하는 단계;(Ⅳ`) 상기 S와 상기 P를 결합하는 단계; 및(Ⅴ`) 상기 (Ⅰ`)단계의 아자이드기와 (Ⅲ`)단계의 알킨기의 반응으로 L이 형성되어 단백질 다이머를 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
59 59
제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 1 내지 42개 아미노산 중에서 선택된 개수의 아미노산을 순차적으로 결합시켜 형성된 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
60 60
제59항에 있어서, 상기 P 및 상기 P`는 1 내지 42개 아미노산 중에서 선택된 개수의 아미노산을 순차적으로 결합시켜 형성된 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
61 61
제57항 또는 제58항에 있어서 상기 말단이 아자이드기인 화합물 및 상기 말단이 알킨기인 화합물은 R`-N3 및 R-≡로 표시되며, 상기 R 및 R`는 또는 중에서 같거나 상이한(n=0 내지 5의 정수, m=1 내지 3의 정수, * 표시는 아자이드기 또는 알킨기인 결합부위) 것을 특징으로 하는 단백질 다이머의 제조방법
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