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마이크로비드의 제조방법에 있어서,3mer인 [(VGVPG)14(KGVPG)] 아미노산 서열을 기초로 하여 PCR반응으로 DNA 염기서열을 합성해 ELP발현 재조합 벡터를 만들고, 대장균BLR(DE3)에 형질전환시켜 생합성된 ELP를 제조하는 ELP제조단계와;마이크로비드 표면에 ELP를 고정화시키는 고정화단계;로 이루어짐을 특징으로 하는 표면개질된 마이크로비드의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 마이크로 비드는, 폴리스티렌(polystyrene), 폴리메틸 메타크릴레이트(polymethyl methacrylate), 라텍스(latex), 실리카(silica), 폴리비닐톨루엔(polyvinyltoluene), 스티렌비닐톨루엔 중합체(styrene-vinyltoluene), 스타렌부타디엔 중합체(styrene-butadien)로 이루어진 군으로부터 일종 선택사용됨을 특징으로 하는 표면개질된 마이크로비드의 제조방법
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제1항에 있어서,상기 고정화단계는, 마이크로비드 표면을 카르복실기로 개질하고 NHS/EDC 반응을 이용하여 ELP를 고정시키는 것을 특징으로 하는 표면개질된 마이크로비드의 제조방법
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제1항에 있어서,상기 고정화단계는,가교제로 SANPAH를 사용하여 마이크로비드와 혼합하고, UV 조사로 결합이 이루어지도록 유도하여 표면에 NHS작용기가 나타나도록 한 후 ELP를 첨가하여 비드표면에 ELP가 고정되도록 하는 것을 특징으로 하는 표면개질된 마이크로비드의 제조방법
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표면이 ELP로 개질된 마이크로 비드 어레이 칩의 제조방법에 있어서,기판에 UV경화형 아크릴 점착제를 첨가하고, 표면이 ELP로 개질된 마이크로비드 혼합과 UV 조사에 의해 선택적으로 마이크로비드가 고정화되도록 한 것을 특징으로 하는 마이크로비드 어레이칩의 제조방법
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제5항에 있어서, 상기 마이크로비드 어레이 칩의 제조는, 기판에 UV 경화형 아크릴 점착제 층을 형성하는 단계와;UV를 조사하여 점착특성을 나타나게 하는 단계와;중합 고분자 용액을 PDMS를 이용한 마이크로콘택트 프린팅 기법으로 점착제 표면에 고정화 시키는 단계와;ELP-마이크로비드를 첨가한 후 알콜 용액으로 중합고분자용액을 제거하는 단계;로 이루어짐을 특징으로 하는 마이크로 비드 어레이칩을 제조방법
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제 5항에 있어서,상기 마이크로비드 어레이 칩의 제조는,기판에 UV 경화형 아크릴 점착제 층을 형성하는 단계와;상기 점착층의 상부에 SU-8 및 AZ계열의 포토리지스트층을 형성하는 단계와;포토마스크를 이용해 UV를 조사하여 포토리지스트층을 선택적으로 제거하여 점착층을 노출시키는 패턴 형성 단계;상기 패턴이 형성된 표면에 ELP-마이크로비드를 첨가하여 노출된 점착제층에 비드가 고정되는 단계;를 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는 마이크로 비드 어레이칩의 제조방법
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제 5항에 있어서,상기 마이크로비드 어레이 칩의 제조는,기판에 SU-8 및 AZ계열의 포토리지스트층을 형성하는 단계와;상기 포토리지스트층의 상부에 UV 경화형 아크릴 점착제 층을 형성하는 단계와;포토마스크를 이용해 UV를 조사하여 점착층과 포토리지스트층을 선택적으로 제거하여 패턴을 형성하는 단계;상기 패턴이 형성된 표면에 ELP-마이크로비드를 첨가하여 남은 점착층에 비드가 고정되는 단계;를 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는 마이크로 비드 어레이칩의 제조방법
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마이크로비드 어레이칩을 이용한 질병 특이항원의 확인방법에 있어서,특이항체와 ELP의 복합체를 NHS/EDC 반응에 의해 제조하는 단계와;제조된 특이항체-ELP 복합체를 ELP-마이크로비드에 첨가하여 온도조정으로 결합을 유도시켜 특이항체-ELP-마이크로비드 복합체를 형성하는 단계와;Biotin-streptavidin-Alexa488 복합체를 특이항원와 NHS/EDC 반응으로 제조한 뒤 첨가하는 단계와;온도를 전이온도 이상으로 유지하여 특이항체와 특이항원과의 특이적 결합이 이루어져 형광확인가능하게 검출하는 단계와;온도를 전이온도 이하로 조정하여 ELP-마이크로비드에 고정화된 특이항체-ELP 복합체를 분리시키는 단계;를 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는 마이크로비드 어레이칩을 이용한 질병 특이항원의 확인방법
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제9항에 있어서,상기 검출 및 분리시키는 조건으로 염농도를 조절에 의해 ELP의 상전이를 유도하는 것을 특징으로 하는 마이크로비드 어레이칩을 이용한 질병 특이항원의 확인방법
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제9항에 있어서,상기 과정에서의 완충용액으로는 탄산나트륨 완충용액(Na2CO3/NaHCO3), 글리신 완충용액(Glycine/NaOH), 인산칼륨 완충용액(KH2PO4/KOH, K2HPO4/KOH, KH2PO4/NaOH, K2HPO4/NaOH), 인산나트륨 완충용액(Na2HPO4/NaH2PO4), 숙신산 완충용액(Succinic acid/NaOH), 아세트산나트륨 완충용액 (Sodium acetate/Acetic acid), 시트르산 완충용액(Citric acid/Sodium citrate), 피로인산나트륨 완충용액(Na4P2O7/HCl) 붕산 완충용액(Boric acid/NaOH), 붕산나트륨 완충용액(Sodium borate/HCl) 으로 이루어진 군으로부터 일종 선택사용됨을 특징으로 하는 마이크로비드 어레이칩을 이용한 질병 특이항원의 확인방법
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