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효소가 집적된 미세튜브를 이용한 정량분석법

  • 기술번호 : KST2015134496
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 효소, 앱타머, 항체, 미세튜브 및 자석비드 또는 기판을 이용한 분석대상 정량분석법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 자석비드 또는 기판 (magnetic bead)에 분석대상결합 앱타머 또는 항체를 결합시키고 이를 분석하고자 하는 분석대상 용액에 넣어 분석대상과 결합시킨 후 자력에 의해 분리한 다음, 상기 분석대상의 정량분석을 위해 효소가 집적된 미세튜브 표면에 상기 분석대상에 선택적으로 결합하는 또 다른 앱타머 또는 항체를 결합시키고, 이를 상기 앱타머 또는 항체가 결합된 자석비드 또는 기판과 결합시켜 제조한 복합체 복합체를 효소반응을 통해 정량분석한다. 이를 통해 저농도 분석대상 진단이 가능해지고, 효소가 집적된 미세튜브의 신호증폭효과를 이용하여 정량이 어려웠던 종래의 검출법을 극복할 수 있다.
Int. CL G01N 33/553 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01) C12N 15/115 (2010.01)
CPC
출원번호/일자 1020117011682 (2011.05.23)
출원인 고려대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1273453-0000 (2013.06.04)
공개번호/일자 10-2011-0130384 (2011.12.05) 문서열기
공고번호/일자 (20130611) 문서열기
국제출원번호/일자 PCT/KR2011/003730 (2011.05.20)
국제공개번호/일자 WO2011145908 (2011.11.24)
우선권정보 대한민국  |   1020100047750   |   2010.05.20
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 국제출원
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2011.05.23)
심사청구항수 27

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김중배 대한민국 서울특별시 강남구
2 오민규 대한민국 서울특별시 강남구
3 이혜진 대한민국 경기도 안산시 상록구
4 김병찬 대한민국 서울특별시 성북구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인주원 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, *층(논현동, 건설회관)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허법 제203조에 따른 서면
[Patent Application] Document according to the Article 203 of Patent Act		 2011.05.23 수리 (Accepted) 1-1-2011-0382953-17
2 수리안내서
Notice of Acceptance		 2011.09.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2011-0089241-60
3 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2012.11.08 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0675385-58
4 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2013.01.08 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2013-0020087-61
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2013.01.08 수리 (Accepted) 1-1-2013-0020077-15
6 등록결정서
Decision to grant		 2013.05.20 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0343833-04
7 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.11 수리 (Accepted) 4-1-2014-5018243-16
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.04.22 수리 (Accepted) 4-1-2014-5049934-62
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.10.10 수리 (Accepted) 4-1-2019-5210941-09
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
(A) 자석비드 (magnetic bead) 또는 기판과 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 항체를 혼합하여, 상기 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 항체가 상기 자석비드 또는 기판의 표면에 결합된 앱타머/항체1-자석비드/기판을 제조하는 단계;(B) 상기 앱타머/항체1-자석비드/기판을 분석대상이 함유된 피시험 용액에 첨가하여, 상기 분석대상이 상기 앱타머/항체1-자석비드/기판의 상기 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 항체에 결합된 분석대상-앱타머/항체1-자석비드/기판을 제조하는 단계;(C) 상기 피시험 용액으로부터 분석대상-앱타머/항체1-자석비드/기판을 분리하는 단계;(D) 효소와 미세튜브를 혼합하여 상기 효소가 상기 미세튜브의 표면에 집적된 효소-미세튜브를 제조하는 단계;(E) 상기 분석대상에 결합하는 제 2 분석대상결합 앱타머 또는 항체와 상기 효소-미세튜브를 혼합하여, 상기 제 2 분석대상결합 앱타머 또는 항체가 상기 효소-미세튜브의 상기 효소에 결합된 앱타머/항체2-효소-미세튜브를 제조하는 단계;(F) 상기 분석대상-앱타머/항체1-자석비드/기판과 상기 앱타머/항체2-효소-미세튜브를 혼합하여, 상기 앱타머/항체2-효소-미세튜브의 상기 제 2 분석대상결합 앱타머 또는 항체가 상기 분석대상-앱타머/항체1-자석비드/기판의 상기 분석대상에 결합된 자석비드/기판-앱타머/항체1-분석대상-앱타머/항체2-효소-미세튜브를 제조하는 단계;(G) 상기 자석비드/기판-앱타머/항체1-분석대상-앱타머/항체2-효소-미세튜브를 분리하는 단계; 및(H) 상기 분리된 자석비드/기판-앱타머/항체1-분석대상-앱타머/항체2-효소-미세튜브의 상기 효소를 정량분석 하는 단계를 포함하는 분석대상 정량분석법
2 2
청구항 1에 있어서,상기 단계 (A)의 상기 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 항체와 상기 자석비드 또는 기판의 결합은 스트렙타비딘(streptavidin)-바이오틴(biotin) 결합, 아비딘(avidin)-바이오틴 결합, EDC [N-ethyl-N'-(dimethlaminopropyl) carbodiimide hydrochloride] 커플링, 설프하이드릴아민(sulphhydrylamine) 커플링, 또는 Ni-NTA(nitrilotriacetic acid)-히스티딘 결합에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
3 3
청구항 1에 있어서,상기 단계 (D)의 상기 효소와 상기 미세튜브의 결합은 스트렙타비딘(streptavidin)-바이오틴(biotin) 결합, 아비딘(avidin)-바이오틴 결합, EDC [N-ethyl-N'-(dimethlaminopropyl) carbodiimide hydrochloride] 커플링, 설프하이드릴아민(sulphhydrylamine) 커플링, 또는 Ni-NTA(nitrilotriacetic acid)-히스티딘 결합에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
4 4
청구항 1에 있어서,상기 단계 (A) 이후 단계 (B) 이전에, 상기 앱타머/항체1-자석비드/기판 중 자석비드 또는 기판 표면의 미반응 결합부위를 보호하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
5 5
청구항 1에 있어서,상기 단계 (B) 이후 단계 (C) 이전에, 상기 분석대상-앱타머/항체1-자석비드/기판 중 자석비드 또는 기판 표면의 미반응 결합부위를 보호하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
6 6
청구항 1에 있어서,상기 단계 (E) 이후 단계 (F) 이전에, 상기 앱타머/항체2-효소-미세튜브 중 미세튜브 또는 효소의 미반응 결합부위를 보호하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
7 7
청구항 1에 있어서,상기 자석비드 또는 기판은 표면에 중성 카르복시기(-COOH), 그의 이온(-COO-), 중성 아민기(-NH2), 그의 이온(-NH- 또는 -NH3＋), 중성 티올기(-SH), 및 그의 이온(-S-)으로 이루어진 군에서 선택된 작용기를 구비한 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
8 8
청구항 1에 있어서,상기 미세튜브는 표면에 중성 카르복시기(-COOH), 그의 이온(-COO-), 중성 아민기(-NH2), 그의 이온(-NH- 또는 -NH3＋), 중성 티올기(-SH), 및 그의 이온(-S-)으로 이루어진 군에서 선택된 작용기를 구비한 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
9 9
청구항 1에 있어서,상기 단계 (A) 이전에, 자석비드 또는 기판과 EDC [N-ethyl-N'-(dimethlaminopropyl) carbodiimide hydrochloride] 용액을 혼합하여 반응시킨 후, 상기 자석비드 또는 기판을 자력으로 고정시키고, 미반응 EDC 용액을 제거하는 단계를 추가로 포함한 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
10 10
청구항 1에 있어서,상기 단계 (D) 이전에, 미세튜브와 EDC [N-ethyl-N'-(dimethlaminopropyl) carbodiimide hydrochloride] 용액을 혼합하여 반응시킨 후, 미반응 EDC 용액을 제거하는 단계를 추가로 포함한 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
11 11
청구항 1에 있어서,상기 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 제 2 분석대상결합 앱타머는 그 서열을 구성하는 염기의 수가 10 내지 250 개인 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
12 12
삭제
13 13
청구항 1에 있어서,상기 분석대상은 트롬빈인 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
14 14
청구항 13에 있어서,상기 제 1 분석대상결합 앱타머는 서열 5'-GGT TGG TGT GGT TGG -3'의 트롬빈 특이성 DNA 앱타머인 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
15 15
청구항 13에 있어서,상기 제 2 분석대상결합 앱타머는 서열 5'- AGT CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT -3'의 트롬빈 특이성 DNA 앱타머인 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
16 16
청구항 13에 있어서,상기 효소는 포도당 산화효소 (glucose oxidase)인 것을 특징으로 하는 분석대상 정량분석법
17 17
자석비드 또는 기판 (magnetic bead)와 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 항체를 혼합하여, 상기 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 항체가 상기 자석비드 또는 기판의 표면에 결합된 앱타머/항체1-자석비드/기판, 및 효소와 미세튜브를 혼합하여 상기 효소가 상기 미세튜브의 표면에 집적된 효소-미세튜브를 제조하고 목적 분석대상에 결합하는 제 2 분석대상결합 앱타머 또는 항체와 상기 효소-미세튜브를 혼합하여, 상기 제 2 분석대상결합 앱타머 또는 항체가 상기 효소-미세튜브의 상기 효소에 결합된 앱타머/항체2-효소-미세튜브를 포함하는 청구항 1 내지 청구항 11 또는 청구항 13 내지 청구항 16 중 어느 한 청구항의 분석대상 정량분석법에 사용되는 분석센서
18 18
청구항 17에 있어서,상기 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 항체와 상기 자석비드 또는 기판의 결합은 스트렙타비딘(streptavidin)-바이오틴(biotin) 결합, 아비딘(avidin)-바이오틴 결합, EDC [N-ethyl-N'-(dimethlaminopropyl) carbodiimide hydrochloride] 커플링, 설프하이드릴아민(sulphhydrylamine) 커플링, 또는 Ni-NTA(nitrilotriacetic acid)-히스티딘 결합에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는 분석센서
19 19
청구항 17에 있어서,상기 효소와 상기 미세튜브의 결합은 스트렙타비딘(streptavidin)-바이오틴(biotin) 결합, 아비딘(avidin)-바이오틴 결합, EDC [N-ethyl-N'-(dimethlaminopropyl) carbodiimide hydrochloride] 커플링, 설프하이드릴아민(sulphhydrylamine) 커플링, 또는 Ni-NTA(nitrilotriacetic acid)-히스티딘 결합에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는 분석센서
20 20
청구항 17에 있어서,상기 앱타머/항체1-자석비드/기판 중 자석비드 또는 기판 표면의 미반응 결합부위는 보호처리된 것을 특징으로 하는 분석센서
21 21
청구항 17에 있어서,상기 앱타머/항체2-효소-미세튜브 중 미세튜브 또는 효소의 미반응 결합부위는 보호처리된 것을 특징으로 하는 분석센서
22 22
청구항 17에 있어서,상기 자석비드 또는 기판은 표면에 중성 카르복시기(-COOH), 그의 이온(-COO-), 중성 아민기(-NH2), 그의 이온(-NH- 또는 -NH3+), 중성 티올기(-SH), 및 그의 이온(-S-)으로 이루어진 군에서 선택된 작용기를 구비한 것을 특징으로 하는 분석센서
23 23
청구항 17에 있어서,상기 미세튜브는 표면에 중성 카르복시기(-COOH), 그의 이온(-COO-), 중성 아민기(-NH2), 그의 이온(-NH- 또는 -NH3+), 중성 티올기(-SH), 및 그의 이온(-S-)으로 이루어진 군에서 선택된 작용기를 구비한 것을 특징으로 하는 분석센서
24 24
청구항 17에 있어서,상기 제 1 분석대상결합 앱타머 또는 제 2 분석대상결합 앱타머는 그 서열을 구성하는 염기의 수가 10 내지 250 개인 것을 특징으로 하는 분석센서
25 25
삭제
26 26
청구항 17에 있어서,상기 분석대상은 트롬빈인 것을 특징으로 하는 분석센서
27 27
청구항 26에 있어서,상기 제 1 분석대상결합 앱타머는 서열 5'- GGT TGG TGT GGT TGG -3'의 트롬빈 특이성 DNA 앱타머인 것을 특징으로 하는 분석센서
28 28
청구항 26에 있어서,상기 제 2 분석대상결합 앱타머는 서열 5'- AGT CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT -3'의 트롬빈 특이성 DNA 앱타머인 것을 특징으로 하는 분석센서
29 29
청구항 26에 있어서,상기 효소는 포도당 산화효소 (glucose oxidase)인 것을 특징으로 하는 분석센서
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1 WO2011145908 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
2 WO2011145908 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
3 WO2011145908 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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1 한국과학재단 한국과학기술원 원천기술개발사업 고활성, 고안정 나노-단백질 원천기술 개발 및 ELISA에서의 응용
2 한국연구재단 고려대학교 산학협력단 해외우수연구기관유치사업 [2단계1차]바텔연구소 유치활용을 통한 급성 호흡기 감염 및 중증 패혈증 조기진단용 나노바이오 시스템 개발
3 한국학술진흥재단 고려대학교 산학협력단 (이공)일반연구자지원-기본연 트립신 가수분해와 바이오연료전지를 위한 나노효소코팅의 안정성 및 활성 기작에 대한 연구