1 |
1
서열번호 7 및 서열번호 8의 염기서열로 표시되는 CaLB41602 프라이머 세트 또는 서열번호 9 및 서열번호 10의 염기서열로 표시되는 CaLB41605 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 염기서열로 표시되는 TaCry2 프라이머 세트; 및서열번호 5 및 서열번호 6의 염기서열로 표시되는 35SCr 프라이머 세트를 포함하는, CryIAc1 유전자 포함 해충 저항성 유전자 변형 배추 416-3 계통의 검정용 조성물
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제 1항에 있어서, 상기 해충은 배추 좀나방 유충인 것을 특징으로 하는 조성물
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3
삭제
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삭제
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제 1항에 있어서, 상기 조성물은 내재유전자 검출용 프라이머를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물
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6
제 5항에 있어서, 상기 내재유전자 검출용 프라이머는 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 CGR 프라이머 세트인 것을 특징으로 하는 조성물
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7 |
7
CryIAc1 유전자 포함 해충 저항성 유전자 변형 배추 416-3 계통의 DNA 단편을 주형으로 하여, 서열번호 9 및 서열번호 10의 염기서열로 표시되는 CaLB41605 프라이머 세트로 증폭된 PCR 증폭 산물 및 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 CGR 프라이머 세트로 증폭된 내재유전자 PCR 증폭 산물을 포함하는, CryIAc1 유전자 포함 해충 저항성 유전자 변형 배추 416-3 계통의 검정용 플라스미드
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8 |
8
제 7항에 있어서, 상기 플라스미드는 서열번호 1의 염기서열, 서열번호 13의 염기서열, 서열번호 2의 염기서열과 상보적 염기서열, 서열번호 15의 SmaI/SrfI 제한효소 절단부위의 염기서열, 서열번호 9의 염기서열, 서열번호 14의 염기서열, 및 서열번호 10의 염기서열과 상보적 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CryIAc1 유전자 포함 해충 저항성 유전자 변형 배추 416-3 계통의 검정용 플라스미드
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9 |
9
서열번호 7 및 서열번호 8의 염기서열로 표시되는 CaLB41602 프라이머 세트 또는 서열번호 9 및 서열번호 10의 염기서열로 표시되는 CaLB41605 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 염기서열로 표시되는 TaCry2 프라이머 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6의 염기서열로 표시되는 35SCr 프라이머 세트; 및서열번호 14로 표시되는 염기서열로 표시되는 TaCaLB416 프로브를 포함하는,실시간(Real Time)-PCR을 위한 CryIAc1 유전자 포함 해충 저항성 유전자 변형 배추 416-3 계통 검정용 조성물
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10 |
10
제 9항에 있어서, 내재유전자 검출용 프라이머 세트 및 프로브로서, 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 CGR 프라이머 세트 및 서열번호 13의 염기서열로 표시되는 TaCGR 프로브를 추가로 포함하는 조성물
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11
제 1항 또는 제 9항을 포함하는 해충 저항성 유전자 변형 농작물의 검정용 키트
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12
서열번호 7 및 서열번호 8의 염기서열로 표시되는 CaLB41602 프라이머 세트 또는 서열번호 9 및 서열번호 10의 염기서열로 표시되는 CaLB41605 프라이머 세트; 서열번호 3 및 서열번호 4의 염기서열로 표시되는 TaCry2 프라이머 세트; 및서열번호 5 및 서열번호 6의 염기서열로 표시되는 35SCr 프라이머 세트를 사용하여, CryIAc1 유전자 포함 해충 저항성 유전자 변형 배추 416-3 계통을 검정하는 방법
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13 |
13
제 12항에 있어서, 상기 TaCry2 프라이머 세트는 Cry1Ac1 유전자 검출, 상기 35SCr 프라이머 세트는 35S::Cry 검출, 상기 CaLB41602 프라이머 세트 및 상기 CaLB41605 프라이머 세트는 레프트 보더(left border, LB) 인접서열 부위 검출을 위한 것임을 특징으로 하는 방법
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14
제 12항에 있어서, 글루타티온 환원효소(Glutathione reductase, GR1) 검출을 위한 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 CGR 프라이머 세트를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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15
제 12항에 있어서, 서열번호 14로 표시되는 염기서열로 표시되는 TaCaLB416 프로브를 추가로 포함하여 실시간-PCR 방법에 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 방법
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16
제 15항에 있어서, 내재유전자 검출용 프라이머 세트 및 프로브로서, 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 CGR 프라이머 세트 및 서열번호 13의 염기서열로 표시되는 TaCGR 프로브를 추가로 포함하여 실시간-PCR 방법에 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 방법
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17
(a) 제 7항의 플라스미드를 카피수 별로 희석하여 DNA 표준물질로 하는 단계; (b) 상기 (a) 단계에서 수득한 표준물질을 주형으로 제 10항의 조성물을 사용하여 실시간-PCR을 수행하여 유전자 카피수를 나타내는 표준곡선을 작성하는 단계;(c) CryIAc1 유전자 포함 해충 저항성 유전자 변형 배추 416-3 계통으로부터 수득한 DNA를 주형으로 제 10항의 조성물을 사용하여 실시간-PCR을 수행하고 그 반응 결과를 표준곡선에 대입하여 유전자 카피수를 산출하는 단계;(d) 상기 (c) 단계에서 산출한 유전자 카피수를 계산식 1에 대입하여 보정계수를 산출하는 단계; (e) 대상 농작물 시료 또는 이의 가공품으로부터 수득한 DNA를 주형으로 제 10항의 조성물을 사용하여 실시간-PCR을 수행하고 그 반응 결과를 표준곡선에 대입하여 유전자 카피수를 산출하는 단계; 및(f) 상기 (e) 단계에서 산출한 유전자 카피수를 계산식 2에 대입하여 유전자 혼입율을 측정하는 단계를 포함하는 대상 농작물 시료 내 도입유전자의 혼입율 정량방법(계산식 1)보정계수 = 도입유전자 또는 도입유전자 인접서열 부위 카피수/내재유전자 카피수(계산식 2)도입유전자 도입율(%) =(도입유전자 또는 도입유전자 인접서열 부위 카피수/내재유전자 카피수)/보정계수 X 100
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18
(a) 제 7항의 플라스미드를 카피수 별로 희석하여 DNA 표준물질로 하는 단계; (b) 상기 (a) 단계에서 수득한 표준물질을 주형으로 제 10항의 조성물을 사용하여 실시간-PCR을 수행하여 유전자 카피수를 나타내는 표준곡선을 작성하는 단계;(c) 대상 농작물 시료 또는 이의 가공품으로부터 수득한 DNA를 주형으로 제 10항의 조성물을 사용하여 실시간-PCR을 수행하고 그 반응 결과를 표준곡선에 대입하여 유전자 카피수를 산출하는 단계; 및(d) 상기 (c) 단계에서 산출한 유전자 카피수를 계산식 3에 대입하여 도입율을 측정하여 그 값이 1인 경우 동형접합체, 0
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