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재조합 대장균을 이용한 파필리오신의 대량 생산방법

  • 기술번호 : KST2015150718
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 재조합 대장균을 이용한 파필리오신의 대량 생산방법에 관한 것이다.본 발명의 재조합 대장균을 이용한 파필리오신의 대량 생산방법은 호랑나비(Papilio xuthus) 유충 유래의 파필리오신 유전자를 갖는 형질전환된 재조합 대장균을 제조하는 단계와, 상기의 형질전환체인 재조합 대장균을 배양한 후, 이를 불용성 재조합 융합단백질로 발현한 후 분리 및 정제하여 파필리오신을 생산하는 단계를 포함하여 구성된다.본 발명에 의해, 재조합된 파필리오신은 그람음성 세균 및 그람양성 세균 등의 각종 박테리아에 대하여 높은 항균활성을 나타내므로 천연 항생제로 유용하게 이용될 수 있다.
Int. CL C12N 15/12 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01)
CPC C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01)
출원번호/일자 1020100105590 (2010.10.27)
출원인 대한민국(농촌진흥청장)
등록번호/일자 10-1424079-0000 (2014.07.22)
공개번호/일자 10-2012-0044167 (2012.05.07) 문서열기
공고번호/일자 (20140804) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2010.10.27)
심사청구항수 1

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국(농촌진흥청장) 대한민국 전라북도 전주시 덕진구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김성렬 대한민국 경기도 화성시 효행로 **,
2 강석우 대한민국 경기도 화성시
3 구태원 대한민국 경기도 화성시 봉담
4 박승원 대한민국 경기도 과천시 별양로 ***
5 이광길 대한민국 경기도 수원시 권선구
6 황재삼 대한민국 경기도 수원시 권선구
7 윤은영 대한민국 경기도 화성시 봉담

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 나동규 대한민국 대전광역시 서구 문예로 **, *층 ***호(둔산동, 오성빌딩)(특허법인오암)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2010.10.27 수리 (Accepted) 1-1-2010-0698773-27
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2011.05.18 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2011.06.14 수리 (Accepted) 9-1-2011-0048565-13
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2012.08.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0510717-44
5 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2012.10.19 수리 (Accepted) 1-1-2012-0853563-63
6 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2012.11.16 수리 (Accepted) 1-1-2012-0942897-62
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2012.12.28 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2012-1087590-18
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2012.12.28 수리 (Accepted) 1-1-2012-1087597-26
9 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2012.12.28 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2012-1092923-36
10 최후의견제출통지서
Notification of reason for final refusal		 2013.05.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0348311-44
11 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2013.07.17 수리 (Accepted) 1-1-2013-0643996-38
12 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2013.08.16 수리 (Accepted) 1-1-2013-0741304-41
13 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2013.09.12 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2013-0833701-44
14 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2013.09.12 수리 (Accepted) 1-1-2013-0833702-90
15 최후의견제출통지서
Notification of reason for final refusal		 2014.01.13 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0026409-91
16 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2014.02.27 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2014-0192177-40
17 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2014.02.27 수리 (Accepted) 1-1-2014-0192187-07
18 등록결정서
Decision to grant		 2014.05.20 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0343210-15
19 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.30 수리 (Accepted) 4-1-2014-5159891-99
20 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2017.06.13 수리 (Accepted) 4-1-2017-0030830-54
21 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2018.07.13 수리 (Accepted) 4-1-2018-5134139-02
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번호 청구항
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불용성 결합단백질인 케토스테로이드 아이소머레이져 유전자에 하기 서열번호 1로 표현되며, 호랑나비(Papilio xuthus) 유충으로부터 유래되는 파필리오신의 성숙 아미노산 영역을 암호화하는 유전자를 순서적으로 융합시키고 C-말단에 6개의 히스티딘 아미노산을 코딩하는 유전자가 연결되어 있는 유전자 카세트를 포함하되,pET29b내에 존재하는 카나마이신 저항성 유전자, 박테리아의 생존 및 복제 유전자, IPTG에 유도되는 프로모터/오페론 영역, 리보좀 결합부위 유전자, KSI 유전자, 파필리오신을 코딩하는 유전자 및 6개의 히스티딘이 번역되는 유전자들로 구성되며, 상기 파필리오신 유전자의 바로 앞쪽과 뒤쪽에 메샤이오닌 잔기를 번역하는 ATG 염기서열을 포함하여 구성된 도 1의 개열지도를 갖는 pET-KSI/Papiliocin 재조합 발현벡터를 제조하는 단계;상기 pET-KSI/Papiliocin 재조합 발현벡터로 대장균을 형질전환하여 형질전환된 재조합 대장균을 제조하는 단계; 및상기 형질전환체인 재조합 대장균을 카나마이신이 함유된 배지에 접종하여 1차 배양후 단백질 발현 유도물질인 IPTG(이소프로필 1-티오-β-D-갈락토시드)을 첨가하여 2차 배양한 다음 원심 분리하여 대장균 세포 펠렛을 수득한 후 초음파 처리를 통해 파쇄하여 상기 케토스테로이드 아이소머레이져-파필리오신 융합단백질이 함유된 불용해성 분획물을 얻는 단계 및,상기 케토스테로이드 아이소머레이져-파필리오신 융합단백질이 함유된 불용해성 분획물을 우레아가 포함된 버퍼용액으로 용해한 후, 시안화브롬으로 화학적인 절단으로 상기 결합단백질과 파필리오신이 분리한 다음 정제하여 정제된 파필리오신을 생산하는 단계;를 포함하는,항균제용 재조합 파필리오신의 대량생산방법
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 농촌진흥청 국립농업과학원 농촌진흥청 기관고유 시험연구사업 곤충 면역관련 단백질 분리 및 의약 소재화