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(1) 양막 상피세포를 제공하는 단계;
(2) 단계 (1)에서 제공된 세포를 세포증식 배지에서 배양하는 단계; 및
(3) 단계 (2)에서 배양된 세포를 간세포 성장인자(HGF)가 첨가된 혈청 배지에서 간세포로 분화시키는 단계
를 포함하는, 알부민 합성능, 우레아 합성능 및 암모니아 제거능을 보이는 양막 상피세포 유래 간세포의 제조방법
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제 1 항에 있어서,
단계 (3)의 혈청 배지가 온코스타틴 엠(oncostatin M) 및 나트륨 부티레이트를 추가로 포함하며 분화된 간세포가 싸이토크롬 P450 1A1/2 활성능을 추가로 보임을 특징으로 하는, 간세포의 제조방법
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제 1 항에 있어서,
단계 (1)에서 양막 상피세포가 양막으로부터 분리된 것임을 특징으로 하는, 간세포의 제조방법
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제 1 항에 있어서,
단계 (1)에서 양막으로부터 양막 상피세포를 분리하지 않고, 양막을 그대로 사용하는 것을 특징으로 하는, 간세포의 제조방법
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제 3 항에 있어서,
양막이 반사 양막, 태반 양막 또는 탯줄 양막인 것을 특징으로 하는, 간세포의 제조방법
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6
제 1 항에 있어서,
단계 (2)에서 세포를 1 내지 10세대까지 배양하는 것을 특징으로 하는, 간세포의 제조방법
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제 1 항에 있어서,
단계 (3)에서 혈청 배지는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지와 F-12 배지의 3:1 혼합 배지에 우태아 혈청, L-글루타민, 하이드로코티손, 인슐린, 트랜스페린, 표피성장인자, 콜레라 톡신, 트라이아이오도타이로닌 및 글루카곤을 첨가한 것을 특징으로 하는, 간세포의 제조방법
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제 1 항에 있어서,
단계 (2)에서 세포증식 배지는 우태아 혈청, L-글루타민, 하이드로코티손, 인슐린, 트랜스페린, 표피성장인자, 콜레라 톡신 및 트리아이오도타이로닌이 첨가된 DMEM 배지와 F-12 배지의 3:1 혼합배지로서 영양세포로 NIH 3T3 J2 세포를 함유하는 것을 특징으로 하는, 간세포의 제조방법
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제 1 항에 있어서,
단계 (2)에서 세포증식 배지는 하이드로코티손, 인슐린, 트렌스페린, 표피성장인자 및 우뇌하수체 추출물이 첨가된 에피라이프(EpiLife) 배지인 것을 특징으로 하는, 간세포의 제조방법
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제 1 항에 따라 제조된, 암모니아 제거능, 알부민 합성능 및 우레아 합성능을 보이는 양막 상피세포 유래 간세포
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제 2 항에 따라 제조된, 암모니아 제거능, 알부민 합성능, 우레아 합성능 및 싸이토크롬 P450 1A1/2 활성능을 보이는 양막 상피세포 유래 간세포
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