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폴딩되는 큰 활성 단백질의 수용성 발현

  • 기술번호 : KST2015206994
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요약 본 발명은 목적 단백질이 폴딩(folding)되어 활성을 나타내는 부피가 큰 단백질 특히, 내부에 막전위 도메인이 존재하는 단백질인 경우에 산성 또는 염기성의 pI 값 및 높은 친수도 값을 가지는 선도 폴리펩티드를 연결하거나, 또는 목적 단백질의 N-말단에 존재하는 수 개의 아미노산을 산성 또는 염기성 pI 값과 높은 친수도를 갖는 아미노산으로 대체시킴으로써 상기와 같은 목적 단백질의 수용성 발현 및 분비를 향상시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 재조합 단백질의 불용성 침전을 방지하고, 세포질 밖 또는 페리플라즘으로의 재조합 단백질의 분비 효율을 향상시킴으로써, 재조합 외래단백질의 생산에 유용하게 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 유용 치료용 단백질의 이동(transduction)에까지 유용하게 이용될 수 있다.
Int. CL C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01)
CPC
출원번호/일자 1020100043855 (2010.05.11)
출원인 대한민국(관리부서:국립수산과학원)
등록번호/일자 10-1184011-0000 (2012.09.12)
공개번호/일자 10-2011-0124471 (2011.11.17) 문서열기
공고번호/일자 (20120927) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2010.05.11)
심사청구항수 21

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국(관리부서:국립수산과학원) 대한민국 부산광역시 기장군

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이상준 대한민국 부산광역시 수영구
2 김영옥 대한민국 부산광역시 남구
3 남보혜 대한민국 부산광역시 남구
4 공희정 대한민국 부산광역시 해운대구
5 김경길 대한민국 부산광역시 연제구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 김남식 대한민국 서울특별시 서초구 남부순환로***길 *-*, *층 (양재동, 가람빌딩)(율민국제특허법률사무소)
2 한윤호 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로**길 **(삼성동) 명지빌딩, *층(선정국제특허법률사무소)
3 박기원 대한민국 서울 강남구 언주로 **길 **, *층, **층, **층, **층(도곡동, 대림아크로텔)(리앤목특허법인)
4 양기혁 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로**길 **(삼성동) 명지빌딩, *층(선정국제특허법률사무소)
5 이인행 대한민국 서울특별시 서초구 남부순환로***길 *-*, *층 (양재동, 가람빌딩)(율민국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2010.05.11 수리 (Accepted) 1-1-2010-0301577-86
2 [대리인사임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Resignation of Agent] Report on Agent (Representative)
2010.11.01 수리 (Accepted) 1-1-2010-0709792-43
3 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)
2010.11.15 수리 (Accepted) 1-1-2010-0742375-36
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2011.01.19 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2011.02.14 수리 (Accepted) 9-1-2011-0007791-19
6 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2011.06.23 수리 (Accepted) 4-1-2011-5128289-93
7 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2011.11.01 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0639459-60
8 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)
2012.01.02 수리 (Accepted) 1-1-2012-0000417-32
9 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)
2012.02.01 수리 (Accepted) 1-1-2012-0083560-21
10 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2012.02.29 수리 (Accepted) 1-1-2012-0169557-88
11 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2012.02.29 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2012-0169558-23
12 수수료 반환 안내서
Notification of Return of Official Fee
2012.03.07 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2012-0023488-39
13 등록결정서
Decision to grant
2012.08.16 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0475002-52
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2020.11.06 수리 (Accepted) 4-1-2020-5245973-82
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
1) 프로모터; 및,2) 상기 프로모터에 작동가능하도록 연결된 선도 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성된 유전자 컨스트럭트를 포함하는 발현벡터에 있어서, 상기 선도 폴리펩티드는 신호서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산으로 구성된 pI 값이 2
2 2
제 1항에 있어서, 2)의 선도 폴리펩티드는 신호서열 단편의 변이체 및 동일한 1개 내지 30개의 친수성 아미노산이 순차적으로 연결되어 이루어지고, 상기 신호서열 단편의 변이체는 상기 신호서열 단편의 N-말단으로부터 2번째 및 3번째 아미노산이 각각 Asp 또는 Glu 중 어느 하나로 치환된 것이고, 상기 친수성 아미노산은 Arg 또는 Lys 중 어느 하나인 발현벡터
3 3
삭제
4 4
제 1항에 있어서, 2)의 선도 폴리펩티드는 서열번호 101번, 서열번호 102번 또는 서열번호 103번으로 기재되는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 발현벡터
5 5
제 1항에 있어서, 2)의 선도 폴리펩티드는 Met 및 1개 내지 30개의 친수성 아미노산이 순차적으로 연결되어 이루어진 것을 특징으로 하는 발현벡터
6 6
제 5항에 있어서, 상기 친수성 아미노산은 Asp 또는 Glu 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 발현벡터
7 7
제 1항에 있어서, 2)의 선도 폴리펩티드는 서열번호 106번 또는 서열번호 107번으로 기재되는 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 발현벡터
8 8
제 1항에 있어서, 상기 폴딩(folding)되는 활성 단백질은 GFP(green fluorescent protein)인 것을 특징으로 하는 발현벡터
9 9
1) 신호서열의 N-말단으로부터 1 내지 10개의 아미노산으로 구성된 N-말단 pI 값이 2
10 10
제 9항에 있어서, 상기 내부에 하나 이상의 막전위 도메인이 존재하고 폴딩되는 활성 단백질은 전장인 것을 특징으로 하는 방법
11 11
제 10항에 있어서, 단계 1)의 선도 폴리펩티드는 신호서열 단편의 변이체 및 1 내지 30개의 친수성 아미노산이 순차적으로 연결되어 이루어지고, 상기 변이체는 상기 신호서열 단편의 N-말단으로부터 2번째 및 3번째 아미노산이 각각 Asp 또는 Glu 중 어느 하나로 치환된 것이고, 상기 친수성 아미노산은 Arg 또는 Lys 중 어느 하나인 방법
12 12
삭제
13 13
제 10항에 있어서, 단계 1)의 선도 폴리펩티드는 Met 및 1 내지 30개의 친수성 아미노산이 순차적으로 연결되어 이루어진 것을 특징으로 하는 방법
14 14
제 13항에 있어서, 상기 친수성 아미노산은 Asp 또는 Glu 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
15 15
제 10항에 있어서, 상기 내부에 하나 이상의 막전위 도메인이 존재하고 폴딩(folding)되는 활성 단백질은 GFP(green fluorescent protein)인 것을 특징으로 하는 방법
16 16
제 9항에 있어서, 상기 내부에 하나 이상의 막전위 도메인이 존재하고 폴딩되는 활성 단백질은 상기 단백질의 N-말단에 존재하는 1개 내지 30개의 아미노산이 결실된 것을 특징으로 하는 방법
17 17
제 16항에 있어서, 단계 1)의 선도 폴리펩티드는 Met 및 1개 내지 30개의 Glu로 구성된 것을 특징으로 하는 방법
18 18
제 16항에 있어서, 상기 내부에 하나 이상의 막전위 도메인이 존재하고 폴딩(folding)되는 활성 단백질은 GFP(green fluorescent protein)인 것을 특징으로 하는 방법
19 19
제 10항 또는 제 16항에 있어서, 추가적으로 단계 5)의 선별된 수용성 발현이 가장 높은 형질전환체의 배양액으로부터 내부에 하나 이상의 막전위 도메인이 존재하고 폴딩되는 활성 단백질을 분리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
20 20
1) 프로모터; 및,2) 상기 프로모터에 작동가능하도록 연결된 선도 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성된 유전자 컨스트럭트를 포함하는 발현벡터에 있어서, 상기 선도 폴리펩티드는 메티오닌에 6 내지 30개의 친수성 아미노산이 연결되어 구성되고, 그 pI 값이 9
21 21
제 20항에 있어서, 2)의 선도 폴리펩티드는 서열번호 108번, 서열번호 112번 또는 서열번호 114번으로 기재되는 아미노산 서열 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 발현벡터
22 22
1) 메티오닌 및 6 내지 30개의 친수성 아미노산으로 구성되고, 그 pI 값이 9
23 23
제 22항에 있어서, 2)의 선도 폴리펩티드는 서열번호 108번, 서열번호 112번 또는 서열번호 114번으로 기재되는 아미노산 서열 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
24 24
삭제
25 25
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27 27
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1 CN101374949 CN 중국 FAMILY
2 CN101952438 CN 중국 FAMILY
3 EP01981979 EP 유럽특허청(EPO) FAMILY
4 EP02220235 EP 유럽특허청(EPO) FAMILY
5 JP21525042 JP 일본 FAMILY
6 JP23504746 JP 일본 FAMILY
7 KR100981356 KR 대한민국 FAMILY
8 KR101049859 KR 대한민국 FAMILY
9 US09422356 US 미국 FAMILY
10 US20090011995 US 미국 FAMILY
11 US20100305040 US 미국 FAMILY
12 US20130084602 US 미국 FAMILY
13 US20140377801 US 미국 FAMILY
14 WO2007089093 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
15 WO2007089093 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
16 WO2009069862 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
17 WO2011142529 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
18 WO2011142529 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

DOCDB 패밀리 정보

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1 AU2007210396 AU 오스트레일리아 DOCDBFAMILY
2 CA2637881 CA 캐나다 DOCDBFAMILY
3 CA2707188 CA 캐나다 DOCDBFAMILY
4 CN101374949 CN 중국 DOCDBFAMILY
5 CN101952438 CN 중국 DOCDBFAMILY
6 CN101952438 CN 중국 DOCDBFAMILY
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8 JP2011504746 JP 일본 DOCDBFAMILY
9 US2009011995 US 미국 DOCDBFAMILY
10 US2010305040 US 미국 DOCDBFAMILY
11 US2013084602 US 미국 DOCDBFAMILY
12 WO2011142529 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
13 WO2011142529 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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