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감염력이 있는 구제역바이러스 Ｏ형 ｃＤＮＡ 클론 및 클론의 전체염기서열

  • 기술번호 : KST2015210015
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 구제역의 7가지 혈청형(O, A, Asia 1, C, SAT 1, SAT 2, SAT 3)중에서, O형 PanAsia 계통에 속하는 2002년 국내 발생한 구제역바이러스(O/SKR/2002)의 전체 RNA 게놈을 double strand DNA형태로 증폭하여 벡터에 삽입한 클론들과 그 서열에 관한 것으로서, 이들 클론은 linear DNA형태로 혹은 in vitro transcribed RNA 형태로 특정 세포에 형질도입(Transfection)시켰을 경우에 감염력이 있는 구제역바이러스를 생성하거나 구제역바이러스 단백질을 생산할 수 있도록 최종 선발된 것들이다.본 발명은 구제역 병원성 확인 연구나 백신 및 진단법 개발의 효과적인 연구 수단으로 폭 넓게 활용될 수 있는 구제역바이러스 cDNA 클론을 작성한 것으로, 클론 작성의 대상이 되는 구제역바이러스는 2002년 국내 양돈농가에서 사육중이던 돼지에서 발생되어 보고된 구제역바이러스 국내분리주 및 임상시료내 바이러스이다. 이 바이러스는 1990년대 초반부터 아시아에서 발생하기 시작하여 현재까지 전 세계적으로 가장 널리 전파된 혈청형 O형의 PanAsia 계통으로 분류되고 있으며, 본 발명에서 이 계통의 바이러스로는 최초로 감염력이 있는 cDNA 형태로 클로닝되었다. 먼저 감염력있는 클론 작성을 위해 돼지유래세포(IB-RS-2)에서 3회 이상 계대증식된 바이러스의 게놈 RNA를 추출하여 cDNA를 합성한 뒤, 전체 게놈을 네 부위로 나누어 증폭시키고 그 각각을 별개의 벡터에 클로닝 하였다. 이렇게 작성된 클론들을 하나의 벡터로 클로닝하여 연결한 뒤, 클로닝 과정에서 임의로 생성된 비의도적 돌연변이를 site-directed mutagenesis를 통하여 원래의 서열과 동일하도록 교정해 주었다. 한편, 분리주 유래의 cDNA 클론에 돼지 및 소 임상시료내 바이러스(야외주) 염기서열을 반영하기 위한 게놈부위(genomic region) 치환 작업을 광범위하게 실시하였다. 이러한 클론들의 세포실험 또는 동물실험을 통해서 우리는 구제역 cDNA클론의 감염성 획득여부에 결정적인 역할을 하는 두 게놈 부위 (poly(C) 및 VP1)를 확인하였고, 이 두 부위에 대한 적절한 유전적 조작(mutagenesis)를 통해서 감염력이 있는 cDNA클론을 최종적으로 선발할 수 있었다. 아울러 감염력은 확인되지 않으나 복제능이 있고 구제역바이러스 단백질을 생산하는 비감염성 cDNA클론도 선발하였다. 특히, VP1 단백질을 번역하는 게놈부위 특정 위치(Residue)의 아미노산서열이 페닐알라닌(Phenylalanine)이 아닌 cDNA클론의 경우, 이 클론은 DNA 혹은 RNA 형태로 세포에 형질도입(Transfection)된 후의 바이러스 생성과정에서 해당 위치의 아미노산서열이 페닐알라닌(Phenylalanine)으로 선택(Selection)되어 치환(Substitution)되는 현상이 지속적으로 확인되었다. 이러한 특정위치의 염기서열(아미노산서열)의 변화는 바이러스가 획득될 때 나타내는 세포변성효과(Cytopathic effect, CPE) 등과 더불어 바이러스 획득여부를 판가름할 수 있는 중요한 지표로 활용될 수 있으며, 바이러스의 침입, 감염 및 진화연구와 바이러스억제제 개발의 소재로도 활용될 수 있다.
Int. CL C12N 15/86 (2006.01) C12N 15/33 (2006.01)
CPC C12N 7/00(2013.01) C12N 7/00(2013.01) C12N 7/00(2013.01)
출원번호/일자 1020110147110 (2011.12.30)
출원인 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)
등록번호/일자 10-1384513-0000 (2014.04.01)
공개번호/일자 10-2013-0078265 (2013.07.10) 문서열기
공고번호/일자 (20140414) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2011.12.30)
심사청구항수 2

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장) 대한민국 경상북도 김천시

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이광녕 대한민국 경기 광명시
2 김수미 대한민국 서울특별시 영등포구
3 박종현 대한민국 경기도 군포시
4 고영준 대한민국 경기도 안양시 만안구
5 이향심 대한민국 경기도 군포시
6 조인수 대한민국 경기도 용인시 수지구
7 이서용 대한민국 경기도 광명시

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 황이남 대한민국 서울시 송파구 법원로 ***, ****호 (문정동, 대명벨리온지식산업센터)(아시아나국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2011.12.30 수리 (Accepted) 1-1-2011-1054536-55
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2012.09.06 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2012.10.15 수리 (Accepted) 9-1-2012-0077793-19
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.04.26 수리 (Accepted) 4-1-2013-0015900-17
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2013.07.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0514492-94
6 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2013.09.25 수리 (Accepted) 1-1-2013-0867300-80
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2013.10.16 수리 (Accepted) 1-1-2013-0932582-41
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2013.10.16 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2013-0932573-30
9 등록결정서
Decision to grant		 2014.02.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0119845-32
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2016.01.21 수리 (Accepted) 4-1-2016-0004930-22
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2016.02.17 수리 (Accepted) 4-1-2016-0010424-27
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번호 청구항
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서열번호 6에 기재된 염기서열을 갖는 replicon 클론
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제6항의 클론에서 poly(C) 부위를 12개에서 24~36개로 연장한 것을 특징으로 하는 감염성 클론
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
국가 R&D 정보가 없습니다.