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CLC-Ka 염화 이온 채널 조절물질 도출을 위한 세포기반 형광 이미징 고효율 검색 및 광범위 특성 연구용 세포주(Cell line for cell-based high-throughput screening of CLC-Ka channel modulators using YFP fluorescence imaging and broad-spectrum studies of CLC-Ka channels)

  • 기술번호 : KST2016006566
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 CLC-Ka 채널을 코딩하는 유전자, Barttin(Y98A)를 코딩하는 유전자 및 형광 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 플라스미드로 형질전환시킨 세포주에 관한 것으로서, 상기 CLC-Ka 채널 및 Barttin(Y98A)는 N-말단 또는 C-말단에 에피토프 태그되어 있고, 상기 형광 단백질은 할라이드 이온에 노란색으로 반응하는 것을 특징으로 하고, 상기 CLC-Ka 채널, Barttin(Y98A) 및 형광 단백질을 안정적으로 발현하는 것을 특징으로 한다. 또한, 테트라사이클린 유도에 의해 발현되는 유도 안정적 발현시스템을 가지며, 세포기반 형광 이미징을 이용한 고효율 검색에 활용할 수 있으며, CLC-Ka 채널과 Barttin(Y98A)를 안정적으로 발현함으로써 CLC-Ka 채널과 Barttin이 관여하고 있는 세포 내 신호전달과정 연구에 이용이 가능함은 물론, 본 발명에 따른 세포주를 이용한 CLC-Ka 채널 작용기작에 대한 분자수준의 연구, 생리학적 기능 연구, 저나트륨혈증 등 CLC-Ka 채널과 관련된 신장 및 심장질환의 예방 및 치료제 개발에 널리 활용될 수 있다.
Int. CL C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 5/071 (2010.01) C12Q 1/04 (2006.01)
CPC C12N 5/16(2013.01)
출원번호/일자 1020140101183 (2014.08.06)
출원인 한국과학기술연구원
등록번호/일자 10-1616026-0000 (2016.04.21)
공개번호/일자 10-2016-0017520 (2016.02.16) 문서열기
공고번호/일자 (20160428) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2014.08.06)
심사청구항수 1

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 최기현 대한민국 경기도 구리시
2 박미리 대한민국 특별시 성북구
3 성진모 대한민국 서울특별시 은평구
4 김지연 대한민국 제주특별자치도 제주시 아란*길 **

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인충현 대한민국 서울특별시 서초구 동산로 **, *층(양재동, 베델회관)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2014.08.06 수리 (Accepted) 1-1-2014-0744964-14
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2014.12.30 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2015.02.10 수리 (Accepted) 9-1-2015-0012714-81
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2015.08.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0568218-79
5 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2015.10.20 수리 (Accepted) 1-1-2015-1016024-59
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2015.11.23 수리 (Accepted) 1-1-2015-1142284-80
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2015.11.23 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2015-1142315-18
8 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2015.11.23 수리 (Accepted) 1-1-2015-1142345-77
9 등록결정서
Decision to grant		 2016.04.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0290333-69
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번호 청구항
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(a) 서열번호 11로 표시되는 HA 태그 유전자, 서열번호 1로 표시되는 염화 이온 채널-Ka(CLC-Ka)을 코딩하는 유전자, 서열번호 7로 표시되는 2A 유전자, 서열번호 3으로 표시되는 Barttin(Y98A)를 코딩하는 유전자, 서열번호 12로 표시되는 c-MYC 태그 유전자, 서열번호 9로 표시되는 2A 유전자 및 서열번호 5로 표시되는 노란색 형광단백질(YFP(H148Q/I152L)) 유전자를 순차적으로 하나의 유전자로 결합하고, 이를 포함하는 플라스미드로 테트라사이클린-조절 발현 인간 신장 배아 세포주(Tetracycline-Regulated Expression Human Embryonic Kidney cell line, T-REx HEK293)에서 형질 전환시킨 수탁번호 KCTC18306P로 기탁된 세포주를 웰 플레이트에서 배양하는 단계;(b) 상기 웰 플레이트에 부착된 배양된 세포주를 염화 이온이 글루코네이트로 치환된 완충용액으로 세척하는 단계;(c) 상기 세척된 세포주에 요오드 이온 및 염화 이온 채널-Ka(CLC-Ka) 조절 후보물질을 주입하는 단계; 및(d) 요오드 이온의 세포 내 유입에 따른 노란색 형광의 소광을 측정하는 단계;를 포함하는 염화 이온 채널-Ka(CLC-Ka) 조절물질의 탐색방법
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