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이분자 형광 상보 시스템을 이용한 알파-시뉴클린 응집체의 세포간 전이 측정방법 및 이를 이용한 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 물질의 스크리닝 방법(Method for measuring cell-to-cell transmission of α-synuclein aggregates using bimolecular fluorescence complementation system and screeing method of a substance for preventing or treating neurodegenerative disease using the same)

  • 기술번호 : KST2016007985
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 단백질 응집체의 신경세포간 전이를 측정하기 위한 듀얼-셀 세포 모델 및 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans) 모델 시스템에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 형광 단백질의 N-말단 또는 C-말단과 알파-시뉴클린 단백질의 융합단백질을 각각 발현하는 형질전환 세포 및 동물 모델 시스템, 이를 이용한 알파-시뉴클린 응집체의 연속적인 세포간 전이 측정방법, 및 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다.
Int. CL G01N 33/52 (2006.01.01) G01N 33/50 (2017.01.01) G01N 33/68 (2006.01.01) G01N 21/64 (2006.01.01) A61K 31/7008 (2006.01.01)
CPC G01N 33/52(2013.01) G01N 33/52(2013.01) G01N 33/52(2013.01) G01N 33/52(2013.01) G01N 33/52(2013.01) G01N 33/52(2013.01) G01N 33/52(2013.01) G01N 33/52(2013.01)
출원번호/일자 1020150125245 (2015.09.04)
출원인 건국대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1762134-0000 (2017.07.21)
공개번호/일자 10-2016-0032674 (2016.03.24) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020140122973   |   2014.09.16
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 국내출원/신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2015.09.04)
심사청구항수 13

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 건국대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 광진구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이승재 대한민국 서울특별시 광진구
2 이혜진 대한민국 서울특별시 광진구
3 배은진 대한민국 서울특별시 성북구
4 김동규 대한민국 서울특별시 광진구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인충정 대한민국 서울특별시 강남구 역삼로***,*층(역삼동,성보역삼빌딩)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 주식회사 뉴라메디 서울특별시 종로구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2015.09.04 수리 (Accepted) 1-1-2015-0860738-24
2 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2015.09.09 수리 (Accepted) 1-1-2015-0875073-11
3 보정요구서
Request for Amendment		 2015.09.17 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2015-0144923-63
4 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2015.09.30 수리 (Accepted) 1-1-2015-0944218-42
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2016.12.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0901067-84
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2017.02.14 수리 (Accepted) 1-1-2017-0150601-49
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2017.02.14 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0150577-30
8 등록결정서
Decision to grant		 2017.06.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0443352-16
9 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2017.07.17 수리 (Accepted) 1-1-2017-0678811-69
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번호 청구항
1 1
형광 단백질의 N-말단 단편과 α-시뉴클린(α-synuclein)이 융합된 제 1융합단백질을 발현하는 제 1세포; 및 상기 형광 단백질의 C-말단 단편과 α-시뉴클린이 융합된 제 2융합단백질을 발현하는 제 2세포를 포함하는 세포 또는 동물 모델 시스템을 이용한 α-시뉴클린 응집체의 세포간 전이 측정방법으로서,상기 제 1세포와 제 2세포의 공동배양 또는 상기 제 1세포와 제 2세포를 모두 포함하는 동물모델의 배양을 통해 제 1세포와 제 2세포에서 각각 제 1융합단백질과 제 2융합단백질을 동시-발현시키는 단계; 및상기 제 1세포와 제 2세포에서, 상기 형광 단백질의 N-말단 단편과 C-말단 단편이 결합하여 발생하는 BiFC (bimolecular fluorescence complementation) 형광 신호를 정량적으로 검출함으로써, 인접한 세포들에서 각각 유래한 α-시뉴클린 단백질의 세포간 이동 및 공동응집(co-aggregation)을 분석하는 단계를 포함하고,상기 동물 모델은 상기 제 1융합단백질을 인두근(pharynx muscle)에서 특이적으로 발현하고, 상기 제 2융합단백질을 인두에 연결된 뉴런에서 특이적으로 발현하도록 제작된 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans) 형질전환 모델인 것을 특징으로 하는, 방법
2 2
제 1항에 있어서, 상기 측정방법은 KCLRF-BP-00322로 기탁된 형질전환 신경섬유아세포주를 제 1세포로, KCLRF-BP-00323으로 기탁된 형질전환 신경섬유아세포주를 제 2세포로 하는 세포 모델 시스템을 이용한 것을 특징으로 하는 방법
3 3
제 2항에 있어서, 상기 제 1세포와 제 2세포를 배양용 배지에서 혼합한 후 계대배양(subculture)하는 단계; 및 계대배양물에서 BiFC-양성 세포의 비율을 측정하는 단계를 추가로 포함하는 방법
4 4
제 1항에 있어서, 상기 형광 단백질은 비너스(Venus) 단백질이며, 상기 제 1융합단백질은 서열번호 4의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되고, 상기 제 2융합단백질은 서열번호 5의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 것을 특징으로 하는 방법
5 5
삭제
6 6
제1항에 있어서,상기 제 1융합단백질은 myo-2 프로모터에, 상기 제 2융합단백질은 flp-21 프로모터에 각각 연결되어 있는 것을 특징으로 하는 방법
7 7
제6항에 있어서,상기 제 2융합단백질은 flp-21 프로모터 활성에 대한 마커를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
8 8
제1항 내지 제4항, 제6항 및 제7항 중의 어느 한 항의 방법을 이용하여 α-시뉴클린의 응집과 관련된 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법으로서,상기 세포 또는 동물 모델 시스템의 제 1세포 및 제 2세포에서 발현되는 후보 유전자의 발현 수준을 증가 또는 감소시키는 단계; 및상기 후보 유전자의 발현 수준의 변화에 따른 상기 BiFC 형광 신호의 변화를 측정함으로써 후보 유전자와 α-시뉴클린 응집체의 세포간 전이와의 관련성을 분석하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
9 9
제1항 내지 제4항, 제6항 및 제7항 중의 어느 한 항의 방법을 이용하여 α-시뉴클린의 응집과 관련된 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법으로서,상기 세포 또는 동물 모델에 시험 물질을 처리하는 단계;상기 시험 물질의 처리에 따른 BiFC 형광 신호의 변화를 측정하는 단계; 및상기 BiFC 형광 신호가 감소된 경우 시험 물질을 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 물질로 판정하는 단계를 포함하는 방법
10 10
제9항에 있어서, 상기 시험 물질의 처리에 따른 BiFC 형광 신호의 변화를 측정하는 단계는 세포 또는 동물 모델의 노화(aging)에 따른 BiFC 형광 신호의 변화를 측정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
11 11
제9항에 있어서, 상기 세포 또는 동물 모델은 리소좀의 기능이 전부 또는 부분적으로 상실된 것을 특징으로 하는 방법
12 12
제8항에 있어서, 상기 후보 유전자는 노화와 관련된 유전자인 것을 특징으로 하는 방법
13 13
제9항에 있어서, 상기 시험 물질은 항-노화 활성을 갖는 물질인 것을 특징으로 하는 방법
14 14
제9항에 있어서, 상기 α-시뉴클린의 응집과 관련된 퇴행성 신경질환은 파킨슨병(Parkinson's disease)인 것을 특징으로 하는 방법
15 15
삭제
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2 US9757402 US 미국 DOCDBFAMILY
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 미래창조과학부 건국대학교 중견연구자지원사업 신경 세포 간 파킨슨 병리 현상 전이 기전 규명