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klotho 유전자의 핵산서열 내 변형에 의해 klotho 유전자가 넉아웃된,klotho 단백질 발현이 불활성화된, Klotho 결핍 질환 돼지 모델
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제1항에 있어서, 상기 핵산서열 내 변형은 하나 이상의 핵산의 결실, 치환, 삽입 또는 역위를 포함하는 것을 특징으로 하는 돼지 모델
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제1항에 있어서, 상기 핵산의 변형은 klotho 유전자의 엑손 3 영역에 일어난 것을 특징으로 하는 돼지 모델
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제1항에 있어서, 상기 핵산서열 내 변형은 뉴클레아제 제제에 의해 인위적으로 일어난 것을 특징으로 하는 돼지 모델
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제1항에 있어서, 상기 klotho 유전자는 RNA-가이드 엔도뉴클레아제에 의해 유전적으로 조작되고, 상기 klotho 유전자를 구성하는 핵산서열 내 PAM(proto-spacer-adjacent Motif) 서열 중 또는 이의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 인접하여 위치하는 연속하는 3bp 내지 25bp의 염기 서열 부위 내의 하나 이상의 뉴클레오타이드의 결실 또는 삽입; 야생형 유전자와 상이한 하나 이상의 뉴클레오타이드로의 치환; 외부 유래의 하나 이상의 뉴클레오타이드 삽입중 하나 이상의 핵산의 변형을 포함하는 것을 특징으로 하는 돼지 모델
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제5항에 있어서, 상기 RNA-가이드 엔도뉴클레아제가 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes) 유래 Cas9 단백질이고, 상기 PAM 서열이 NGG(N은 A, T, C 또는 G임)인 것을 특징으로 하는 돼지 모델
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제1항에 있어서, Klotho 결핍 질환은 동맥경화, 골다공증, 뇌졸중 및 알츠하이머로 구성된 군에서 선택되는 1이상의 질환인 것을 특징으로 하는 돼지 모델
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klotho 유전자를 구성하는 핵산 서열 중 1 이상의 부위에 상보적인 결합을 형성할 수 있는 가이드 핵산 또는 이를 암호화하는 핵산; 및RNA-가이드 엔도뉴클레아제 또는 이를 암호화하는 핵산을 포함하는 klotho 유전자 넉아웃용 조성물
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제8항에 있어서, 상기 RNA-가이드 엔도뉴클레아제는스트렙토코커스 피요게네스(Streptococcus pyogenes) 유래의 Cas9 단백질, 캄필로박터 제주니 (Campylobacter jejuni) 유래의 Cas9 단백질, 스트렙토코커스 써모필러스 (Streptococcus thermophilus) 유래의 Cas9 단백질, 스트렙토코커스 아우레우스 (Streptococcus aureus) 유래의 Cas9 단백질, 네이세리아 메닝기디티스 (Neisseria meningitidis)유래의 Cas9 단백질, 및 Cpf1 단백질로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 조성물
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제8항에 있어서, 상기 가이드 핵산은 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 조성물
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제8항에 있어서, 상기 조성물은 Cas9 단백질 및 sgRNA로 구성되는 RNP(ribonucleoprotein) 형태인 것을 특징으로 하는 조성물
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klotho 유전자 상의 표적 게놈 유전자좌를 포함하는 돼지 세포 또는 배아에, (a) 상기 표적 게놈 유전자좌 부위와 상보적으로 결합할 수 있는 가이드 RNA; 및 (b)RNA-가이드 엔도뉴클레아제 (RNA-Guided Endonuclease; RGEN)을 접촉시키는 단계를 포함하는, klotho 유전자의 핵산 서열이 변경된 세포 또는 배아를 제조하는 방법
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제12항에 있어서, 상기 접촉시키는 단계는 전기천공법 (electroporation), 리포좀, 플라스미드, 바이러스 벡터, 나노파티클(nanoparticles) 및 PTD (Protein translocation domain) 융합 단백질 방법 중 선택되는 1이상의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법
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제12항에 있어서, 상기 접촉시키는 단계는 Cas9 단백질 및 가이드 RNA로 구성되는 RNP(ribonucleoprotein) 형태로 in vitro에서 돼지 세포에 도입되는 것을 특징으로 하는 방법
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제13항에 있어서,상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스, 및 아데노-연관 바이러스(AAV) 로 구성된 군에서 선택되는 1이상인 것을 특징으로 하는 방법
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제12항에 있어서, 상기 방법은 체세포 핵이식 기술(somatic cell nuclear transfer, SCNT)에 의해 이루어진 것을 특징으로 하는 방법
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