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무세포 단백질 합성 시스템을 이용한 면역 어세이 신호증폭 방법 및 이의 용도

  • 기술번호 : KST2020001730
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 무세포 단백질 합성 시스템을 이용한 면역 어세이 신호증폭 방법 및 이의 용도에 관한 것으로, 상세하게는 항원항체 반응에서 검출을 위해 접합하는 리포터 단백질(효소) 대신에 이를 번역할 수 있는 DNA를 접합시킨 후, 항원항체 반응 후, 무세포 단백질 합성을 통해 다량의 단백질로 합성함으로써 검출 민감도를 향상시킬 수 있는 방법에 관한 것이다.
Int. CL G01N 33/548 (2006.01.01) G01N 33/543 (2006.01.01) G01N 33/68 (2006.01.01)
CPC G01N 33/548(2013.01) G01N 33/548(2013.01) G01N 33/548(2013.01) G01N 33/548(2013.01) G01N 33/548(2013.01) G01N 33/548(2013.01) G01N 33/548(2013.01)
출원번호/일자 1020180164950 (2018.12.19)
출원인 충남대학교산학협력단
등록번호/일자 10-2085636-0000 (2020.03.02)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20200306) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2018.12.19)
심사청구항수 8

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 충남대학교산학협력단 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김동명 대전광역시 서구
2 이경호 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 최규환 대한민국 대전광역시 서구 한밭대로 ***, **층 그린국제특허법률사무소 (둔산동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 충남대학교 산학협력단 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2018.12.19 수리 (Accepted) 1-1-2018-1277453-35
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2019.02.14 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2019.04.11 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2019-0077148-15
4 [우선심사신청]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Preferential Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)		 2019.06.20 수리 (Accepted) 1-1-2019-0635043-38
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2019.07.16 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0510373-94
6 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2019.09.11 수리 (Accepted) 1-1-2019-0937394-43
7 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2019.10.16 수리 (Accepted) 1-1-2019-1052225-12
8 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2019.11.18 수리 (Accepted) 1-1-2019-1180017-35
9 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2019.12.16 수리 (Accepted) 1-1-2019-1297377-66
10 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2019.12.16 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2019-1297390-50
11 등록결정서
Decision to grant		 2020.02.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0142781-45
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
(1) 1차 항체를 지지체에 고정하는 단계; (2) 상기 단계 (1)에서 고정된 1차 항체와 반응하는 항원을 포함하는 시료를 첨가하여 항원항체 반응을 수행하는 단계;(3) 상기 항원항체 반응한 항원에, 리포터 단백질을 코딩하는 이중나선 DNA가 접합된 2차 항체를 결합시키는 단계;(4) 상기 단계 (3) 이후에, 2차 항체에 접합된 DNA를 주형으로 하고, RNase E가 결핍된 대장균 추출물을 반응액으로 이용하며, 마그네슘 이온의 농도가 6~10mM이고, 반응온도가 15~25℃이며, 반응시간이 3~6시간인 조건으로, 가용성 단백질의 함량을 증진시키는 것을 특징으로 하는 무세포 단백질 합성을 수행하는 단계; 및(5) 상기 무세포 단백질 합성법으로 합성된 리포터 단백질을 분석하여 항원을 검출하는 단계;를 포함하는 신호가 증폭된 발현 면역 어세이 방법
2 2
제1항에 있어서, 상기 단계 (2)에서, 시료는 혈액, 혈장, 혈청, 소변 또는 림프액 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 신호가 증폭된 발현 면역 어세이 방법
3 3
제1항에 있어서, 상기 단계 (3)에서 2차 항체는 제1 바이오틴을 링커로 하여 스트렙트아비딘이 결합되고, 상기 스트렙트아비딘에 결합된 제2 바이오틴은 리포터 효소를 코딩하는 이중나선 DNA와 결합되어 2차 항체-제1 바이오틴-스트렙트아비딘-제2 바이오틴-DNA의 순으로 연결된 구조로 이루어진 것을 특징으로 하는 신호가 증폭된 발현 면역 어세이 방법
4 4
삭제
5 5
삭제
6 6
제1항에 있어서, 상기 단계 (5)의 리포터 단백질이 기질의 발색 또는 발광 반응을 촉매 하는 효소인 경우, 리포터 단백질을 분석하여 항원을 검출하는 단계는 리포터 단백질에 기질을 첨가하여 반응 생성물을 획득한 후, 획득된 반응생성물의 함량을 검출하는 단계인 것을 특징으로 하는 신호가 증폭된 발현 면역 어세이 방법
7 7
제1항에 있어서, 상기 단계 (5)의 리포터 단백질이 형광 단백질인 경우, 리포터 단백질을 분석하여 항원을 검출하는 단계는 리포터 단백질의 형광 값을 검출하는 단계인 것을 특징으로 하는 신호가 증폭된 발현 면역 어세이 방법
8 8
제6항에 있어서, 상기 기질의 발색반응을 촉매하는 효소는 호스래디쉬 퍼옥시다아제(horseradish peroxidase; HRP), 알칼리성 인산가수분해효소(alkaline phosphatase), 글루코시다아제(glucosidase), 티로시나아제(tyrosinase) 및 GUS(β-glucuronidase) 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 신호가 증폭된 발현 면역 어세이 방법
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제6항에 있어서, 상기 기질의 발광 반응을 촉매하는 효소는 루시퍼라아제인 것을 특징으로 하는 신호가 증폭된 발현 면역 어세이 방법
10 10
제7항에 있어서, 상기 형광 단백질은 GFP(Green Fluorescent Protein), YFP(Yellow Fluorescent Protein), RFP(Red Fluorescent Protein) 및 에쿠오린(Aequorin) 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 신호가 증폭된 발현 면역 어세이 방법
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 과학기술정보통신부 충남대학교 원천기술개발사업 DNA 라이브러리 발현 및 세포내 활성 동시 분석기술