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형광 편광 기법을 이용한 엑소좀 염색 및 정량 방법

  • 기술번호 : KST2020002351
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 형광 편광 기법을 이용한 엑소좀 염색 및 정량 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 지질막 염색제(lipid membrane fluorescent dye)를 이용해 엑소좀을 염색시킨 다음, 형광 편광 값을 분석하여 엑소좀을 정량 하는 방법, 상기 방법을 이용하는 엑소좀 염색 및 정량용 키트 및 암 진단을 위한 정보 제공방법에 관한 것이다. 본 발명의 형광 편광 기법을 이용한 엑소좀 염색 및 정량 방법은 모든 반응이 세척 없이 단일 튜브에서 이루어지며, 복잡한 과정 없이 신속하고 효율적으로 엑소좀을 염색 및 정량 할 수 있다. 또한, 본 발명의 엑소좀 정량 방법은 상용키트에 비해 높은 정밀도와 재현성으로 암 세포 및 정상 세포에서 분비되는 엑소좀을 성공적으로 정량화 하였으며, 암 세포에서 증가된 엑소좀을 효과적으로 측정 가능하므로, 암의 조기 진단을 신속하고 간단하게 수행할 수 있는 효과가 있다.
Int. CL G01N 33/487 (2006.01.01) G01N 1/30 (2006.01.01) G01N 21/64 (2006.01.01) G01N 33/574 (2006.01.01)
CPC G01N 33/48721(2013.01) G01N 33/48721(2013.01) G01N 33/48721(2013.01) G01N 33/48721(2013.01)
출원번호/일자 1020180105485 (2018.09.04)
출원인 건국대학교 산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2020-0027330 (2020.03.12) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2018.09.28)
심사청구항수 11

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 건국대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 광진구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 박기수 서울특별시 광진구
2 칼리무스 칼리솨라랄 서울특별시 광진구
3 권우영 경기도 용인시 처인구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인이룸리온 대한민국 서울특별시 서초구 사평대로 ***, *층 (반포동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 건국대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 광진구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2018.09.04 수리 (Accepted) 1-1-2018-0879433-52
2 [심사청구]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)
2018.09.28 수리 (Accepted) 1-1-2018-0962909-19
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2019.03.19 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2019.05.09 수리 (Accepted) 9-1-2019-0021175-20
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2019.12.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0921353-10
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2020.02.06 수리 (Accepted) 1-1-2020-0126991-15
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2020.02.06 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0126992-50
8 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2020.04.01 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0239133-21
9 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2020.05.04 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0450764-13
10 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견서·답변서·소명서
2020.05.04 수리 (Accepted) 1-1-2020-0450763-78
11 등록결정서
Decision to grant
2020.05.20 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0348095-18
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
(a) 생물학적 시료로 부터 엑소좀을 분리하는 단계; (b) 상기 분리된 엑소좀과 알킬기를 포함하는 지방족 및 형광체로 구성된 지질막 염색제를 반응시켜, 엑소좀을 염색시키는 단계; 및 (c) 형광 편광(fluorescence polarization) 값을 측정하여 엑소좀을 정량하는 단계;를 포함하는 형광 편광법을 이용한 엑소좀 염색 및 정량 방법
2 2
제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 생물학적 시료는 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 뇨, 객담, 림프액 및 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 엑소좀 염색 및 정량 방법
3 3
삭제
4 4
제1항에 있어서, 상기 형광체는 플루오레세인(fluorescein), 플루오레세인 클로로트리아지닐(fluorescein chlorotriazinyl), 로다민 그린(rhodamine green), 로다민 레드(rhodamine red), 테트라메틸로다민(tetramethylrhodamine), 플루오레세인 아이소싸이오사이아네이트(Fluorescein isothiocyanate; FITC) 오레곤 그린(Oregon green), 알렉사 플루오로(Alexa Fluor), JOE, ROX, HEX, 텍사스 레드(Texas Red), TET, TRITC, TAMRA, 시아닌(Cyanine) 계열 염료 및 씨아디카르보시아닌(thiadicarbocyanine) 염료로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 엑소좀 염색 및 정량 방법
5 5
제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 지질막 염색제는 플루오레세인 아이소싸이오사이아네이트-컨쥬게이티드 페길레이티드 모노아실 리피드(Fluorescein isothiocyanate conjugated PEGylated monoacyl lipid; FITC-C18-PEG), 1, 2-디스테아로일-에스엔-글리세로-3-포스포에탄올아민-폴리에틸렌 글리콜(1, 2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-Polyethylene glycol; DSPE- PEG), 콜레스테롤-폴리에틸렌 글리콜(cholesterol-Polyethylene glycol; Cholesterol-PEG), PKH67 레드 플루오레센트 셀 링커(Red Fluorescent Cell Linker), 펑션 스페이서 리피드-플루오레세인(Function Spacer Lipid-Fluorescein; FSL-Fluorescein), 엔-(플루오레세인-5-티오카르바모일)-1,2-디헥사데칸오일-에스엔-글리세로-3-포스포에탄올아민(N-(fluorescein-5-thiocarbamoyl)-1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine; Fluorescein DHPE) 및 5-도데카노일아미노 플로오레세인(5-dodecanoylamino fluorescein ; C12-FAM)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 엑소좀 염색 및 정량 방법
6 6
제1항에 있어서, 상기 (c) 단계는 (ⅰ) 엑소좀 표준물질을 농도별로 희석하여 준비한 다음, 지질막 염색제와 함께 반응시킨 후, 형광 편광을 측정하여 표준 곡선을 작성하는 단계; 및 (ⅱ) 시료에서 분리한 엑소좀에 대한 형광 편광 값을 표준 곡선에 대입하여 엑소좀 수를 정량하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 엑소좀 염색 및 정량 방법
7 7
삭제
8 8
(a) 환자의 생물학적 시료로부터 엑소좀을 분리하는 단계; (b) 상기 분리된 엑소좀과 알킬기를 포함하는 지방족 및 형광체로 구성된 지질막 염색제를 반응시켜, 엑소좀을 염색시키는 단계; 및 (c) 형광 편광(fluorescence polarization) 값을 측정하여 엑소좀을 정량하는 단계; 를 포함하는 암 진단을 위한 정보 제공 방법
9 9
제8항에 있어서, 상기 암은 대장암, 치종암, 혈액암, 후두암, 식도암, 구강암, 기저세포암, 담도암, 갑상선암, 직장암, 위암, 전립선암, 유방암, 신장암, 간암, 뇌종양, 폐암, 자궁암, 결장암, 방광암 및 췌장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보 제공 방법
10 10
제8항에 있어서, 상기 (a) 단계의 생물학적 시료는 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 뇨, 객담, 림프액 및 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보 제공 방법
11 11
삭제
12 12
제8항에 있어서, 상기 형광체는 플루오레세인(fluorescein), 플루오레세인 클로로트리아지닐(fluorescein chlorotriazinyl), 로다민 그린(rhodamine green), 로다민 레드(rhodamine red), 테트라메틸로다민(tetramethylrhodamine), 플루오레세인 아이소싸이오사이아네이트(Fluorescein isothiocyanate; FITC) 오레곤 그린(Oregon green), 알렉사 플루오로(Alexa Fluor), JOE, ROX, HEX, 텍사스 레드(Texas Red), TET, TRITC, TAMRA, 시아닌(Cyanine) 계열 염료 및 씨아디카르보시아닌(thiadicarbocyanine) 염료로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보 제공 방법
13 13
제8항에 있어서, 상기 (b) 단계의 지질막 염색제는 플루오레세인 아이소싸이오사이아네이트-컨쥬게이티드 페길레이티드 모노아실 리피드(Fluorescein isothiocyanate conjugated PEGylated monoacyl lipid; FITC-C18-PEG), 1, 2-디스테아로일-에스엔-글리세로-3-포스포에탄올아민-폴리에틸렌 글리콜(1, 2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-Polyethylene glycol; DSPE- PEG), 콜레스테롤-폴리에틸렌 글리콜(cholesterol-Polyethylene glycol; Cholesterol-PEG), PKH67 레드 플루오레센트 셀 링커(Red Fluorescent Cell Linker), 펑션 스페이서 리피드-플루오레세인(Function Spacer Lipid-Fluorescein; FSL-Fluorescein), 엔-(플루오레세인-5-티오카르바모일)-1,2-디헥사데칸오일-에스엔-글리세로-3-포스포에탄올아민(N-(fluorescein-5-thiocarbamoyl)-1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine; Fluorescein DHPE) 및 5-도데카노일아미노 플로오레세인(5-dodecanoylamino fluorescein ; C12-FAM)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보 제공 방법
14 14
제8항에 있어서, 상기 (c) 단계는 (ⅰ) 엑소좀 표준물질을 농도별로 희석하여 준비한 다음, 지질막 염색제와 함께 반응시킨 후, 형광 편광을 측정하여 표준곡선을 작성하는 단계; 및 (ⅱ) 생물학적 시료에서 분리한 엑소좀에 대한 형광 편광 값을 표준 곡선에 대입하여 엑소좀 수를 정량하고, 정상 대조군에서 분리한 엑소좀 수와 비교하여 엑소좀의 수가 증가한 경우를 암인 것으로 정보를 제공하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보 제공 방법
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패밀리정보가 없습니다
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1 교육부 건국대학교 기본연구지원사업(기본) [단독](1차)엑소좀을 이용한 초고감도 생체물질 검출 기술 개발