1 |
1
a) 제1 형광염료로 표지되고, 2 내지 40개의 시토신과 구아닌의 반복 서열(CG 반복 서열)을 포함하는 제1 단일 가닥과 제2 형광염료로 표지되고, 2 내지 40개의 CpG 반복 서열을 포함하는 제2 단일 가닥으로 이루어진 이중가닥 DNA 분자에 메틸전달효소 및 후보약물을 처리하여 메틸화 반응시키는 것;b) 대조군으로서 상기 a)와 동일한 이중가닥 DNA 분자에 메틸전달효소를 처리하여 메틸화 반응시키는 것;c) 상기 a) 와 b)의 메틸화된 이중가닥 DNA 각각을 1가 또는 2가의 양이온성 염 용액과 반응시켜 제1 형광염료와 제2 형광염료 사이의 단분자 FRET(single molecule fluorescence resonance energy transfer) 신호를 측정하여, 각각 독립적으로 상기 a)의 이중가닥 DNA 분자에서 B형 DNA와 Z형 DNA의 비율을 결정하고, b)의 이중가닥 DNA 분자에서 B형 DNA와 Z형 DNA의 비율을 결정하는 것; 및d) 상기 b)의 이중가닥 DNA 분자에서 Z형 DNA 비율과 비교해서, a)의 이중가닥 DNA 분자에서 Z형 DNA 비율이 낮은 경우, 상기 후보약물은 메틸전달효소 저해제로 분류하고; a)의 이중가닥 DNA 분자에서 Z형 DNA 비율이 높은 경우, 상기 후보약물은 메틸전달효소 촉진제로 분류하는 것을 포함하는 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
2 |
2
제1항에 있어서,상기 DNA 분자는 5 내지 50nt 길이인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
3 |
3
제1항에 있어서,상기 제1 형광염료와 제2 형광염료는 쌍을 이루며, 둘 중 하나는 형광 도너, 나머지 하나는 형광 억셉터인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
4 |
4
제1항에 있어서,상기 형광염료는 시아닌(cyanine)계, 플루오레세인계, 로다민, 테트라메틸로다민 아이소티오시아네이트(TRITC), 쿠마린, 알로피코시아닌, R-피코에리트린, 알렉사 플루오르, 알로피코에리트린, 텍사스 레드(Texas Red) 및 프린스톤 레드(Princeton Red)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
5 |
5
제4항에 있어서,상기 시아닌(cyanine) 계 형광염료는 Cy3, Cy5, Cy5
|
6 |
6
제4항에 있어서,상기 플루오레세인계 염료는 5-(및 6)-카복시플루오레세인, 5-카복시플루오레세인, 6-카복시플루오레세인, 6-(플루오레세인)-5-카복사미드 핵산 및 플루오레세인 아이소티오시아네이트, 알렉사플루오르(AlexaFluor: 상표명) 염료, 예를 들면 알렉사플루오르 488(상표명) 또는 알렉사플루오르 594(상표명)인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
7 |
7
제1항에 있어서,상기 제1 단일 가닥 DNA와 제2 단일 가닥 DNA 중 어느 하나는 DNA 5' 또는 3' 말단에 비오틴이 결합된 것인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
8 |
8
제1항에 있어서,상기 1가 또는 2가의 양이온성 이온은 Mg2+, Ca2+, Ni2+ 및 Fe2+로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
9 |
9
제1항에 있어서, 상기 염용액의 농도는 0
|
10 |
10
제1항에 있어서, 상기 c)의 FRET 신호의 측정 전에 메틸화된 이중가닥 DNA을 아비딘이 코팅된 기재에 처리하여 비오틴과 아비딘을 결합하여 DNA 분자를 기재에 고정시키는 것을 더 포함하는 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
11 |
11
제1항에 있어서, 2 내지 40개의 CG 반복 서열은 제1 또는 제2 단일 가닥 DNA의 중심에 포함되는 것인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
12 |
12
제1항에 있어서, 상기 제1 단일 가닥 DNA 및 제2 단일 가닥 DNA는 메틸화된 시토신(C) 염기를 포함하지 않거나, 일부 또는 전부 메틸화된 시토신(C) 염기를 포함하는 것인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물을 스크리닝하는 방법
|
13 |
13
비오틴 및 제1 형광염료로 표지되고, 2 내지 40개의 CG 반복 서열을 포함하는, 5 내지 50nt의 제1 단일 가닥과 제2 형광염료로 표지되고, 2 내지 40개의 CG 반복 서열을 포함하는, 5 내지 50nt의 제2 단일 가닥으로 이루어진 이중가닥 DNA 분자; 메틸전달효소; 1가 또는 2가의 양이온성 염을 포함하는 용액, 및 아비딘으로 코팅된 기재를 포함하고, 상기 제1 형광염료와 제2 형광염료는 쌍을 이루며, 둘 중 하나는 형광 도너, 나머지 하나는 형광 억셉터인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물 스크리닝용 키트
|
14 |
14
제13항에 있어서,상기 형광염료는 시아닌(cyanine)계, 플루오레세인계, 로다민, 테트라메틸로다민 아이소티오시아네이트(TRITC), 쿠마린, 알로피코시아닌, R-피코에리트린, 알렉사 플루오르, 알로피코에리트린, 텍사스 레드(Texas Red) 및 프린스톤 레드(Princeton Red)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물 스크리닝용 키트
|
15 |
15
제14항에 있어서,상기 시아닌(cyanine) 계 형광염료는 Cy3, Cy5, Cy5
|
16 |
16
제14항에 있어서,상기 플루오레세인계 염료는 5-카복시플루오레세인, 6-카복시플루오레세인, 6-(플루오레세인)-5-카복사미드 헥산 및 플루오레세인 아이소티오시아네이트, 알렉사플루오르(AlexaFluor: 상표명) 염료, 예를 들면 알렉사플루오르 488(상표명) 또는 알렉사플루오르 594(상표명)인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물 스크리닝용 키트
|
17 |
17
제13항에 있어서,상기 1가 또는 2가의 양이온성 이온은 Mg2+, Ca2+, Ni2+ 및 Fe2+로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 메틸전달효소 작용을 촉진 또는 억제하는 약물 스크리닝용 키트
|
18 |
18
제13항에 있어서, 상기 염용액의 농도는 0
|