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다양한 시그널 펩타이드 (signal peptide) 중에서 목적 단백질 (target peptide)을 숙주세포 밖으로 효율적으로 분비하는 특정 시그널 펩타이드 (signal peptide)를 선별하기 위한 조성물로서, 상기 조성물은 시그널 펩타이드 태그 (Signal peptide tag, SP-tag)를 포함하는 폴리펩타이드 또는 이를 코딩하는 핵산분자를 포함하고;상기 시그널 펩타이드 태그는 각각의 시그널 펩타이드 별로 다르게 바코딩 되어 있는 3개 이상의 아미노산으로 이루어져 있는 바코딩 서열 (Barcoding sequence site)을 포함하며;상기 3개 이상의 아미노산은 L(Leucine), P(Proline), A(Alanine), W(Tryptophan), Y(Tyrosine), T(Threonine), S(Serine), E(Glutamate) 및 D(Aspartate)로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 1 항에 있어서, 상기 시그널 펩타이드 태그는 단백질 분해성 절단 부위(proteolytic cleavage site)를 상기 바코딩 서열의 N 말단에 추가적으로 포함하여, 단백질에 의해 바코딩 서열이 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 2 항에 있어서, 상기 단백질 분해성 절단 부위는 트립신 절단 부위(trypsin cleavage site), 트롬빈 절단 부위(thrombin cleavage site), 엔터로키나아제 절단 부위 (enterokinase cleavage site), 인자 Xa 절단 부위 (Factor Xa cleavage site), 콜라게나아제 절단 부위 (collagenase cleavage site) 및 TEV 프로테아제 절단부위 (TEV protease cleavage site)로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 3 항에 있어서, 상기 단백질 분해성 절단 부위는 트립신 절단 부위인 것을 특징으로 하는 조성물
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제 4 항에 있어서, 상기 트립신 절단 부위는 K(Lysine) 및 R(Arginine)로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 3 항에 있어서, 상기 단백질 분해성 절단 부위는 바코딩 서열과 링커로 연결되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 6 항에 있어서, 상기 링커는 1개 이상의 G(Glycine)를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 1 항에 있어서, 상기 시그널 펩타이드 태그를 포함하는 폴리펩타이드는 숙주세포 배양액에서 바코딩 서열을 분리 및 정제하기 위한 친화-태그 (Affinity tag)를 상기 바코딩 서열의 C 말단에 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 8 항에 있어서, 상기 친화 태그는 His-tag (Histidine tag), myc-tag, FLAG-tag, SUMO-tag (small ubiquitin-like modifier tag), CYD-tag (covalent yet dissociable NorpD peptide tag), HPC-tag (heavy chain of protein C tag), CBP-tag (calmodulin binding peptide tag) 및 HA-tag (hemagglutinin-tag)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 9 항에 있어서, 상기 친화 태그는 2 내지 15개의 히스티딘으로 구성된 His-tag인 것을 특징으로 하는 조성물
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제 1 항에 있어서, 상기 시그널 펩타이드 태그는 하기의 식 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 조성물:003c#식 1003e#트립신 절단 부위 - 링커 - 바코딩 서열 - 링커 - 친화 태그 - 트립신 절단 부위
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제 11 항에 있어서, 상기 시그널 펩타이드 태그는 하기의 식 2로 표시되는 것을 특징으로 하는 조성물:003c#식 2003e#K(Lysine) 또는 R(Arginine) - G(Glycine) - 바코딩 서열 - G(Glycine) - 친화 태그 - K(Lysine) 또는 R(Arginine)
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제 1 항에 있어서, 상기 시그널 펩타이드 태그를 포함하는 폴리펩타이드는 시그널 펩타이드 태그의 N 말단에 목적 단백질이 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 13 항에 있어서, 상기 시그널 펩타이드 태그를 포함하는 폴리펩타이드는 상기 목적 단백질의 N 말단에 시그널 펩타이드가 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물
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제 1 항 또는 제 14 항의 시그널 펩타이드 태그를 포함하는 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산분자를 포함하는 벡터
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하기의 단계를 포함하는, 숙주세포 내에서 목적 단백질을 발현하여 숙주세포 외부로 상기 목적 단백질을 분비하는 특정 시그널 펩타이드의 선별방법:1) 다양한 시그널 펩타이드에 대한 제 15 항의 벡터를 제작하여 라이브러리를 구축하는 단계;2) 상기 벡터를 이용하여 숙주세포를 형질전환시키는 단계;3) 상기 형질전환된 숙주세포로부터 시그널 펩타이드 태그를 포함하는 폴리펩타이드를 발현시키는 단계; 및4) 상기 형질전환된 숙주세포 외부로 분비된 시그널 펩타이드 태그를 포함하는 폴리펩타이드, 시그널 펩타이드 태그 또는 시그널 펩타이드 태그에 포함된 바코딩 서열을 정량하는 단계
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제 16 항에 있어서, 상기 숙주세포는 CHO 세포, HeLa 세포, HEK293 세포, BHK 세포, COS7 세포, COP5 세포, A549 세포, NIH3T3 세포, MDCK 세포 및 WI38 세포로 구성된 군으로부터 선택되는 세포인 것을 특징으로 하는 선별방법
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제 16 항에 있어서, 상기 단계 3)은 시그널 펩타이드 태그를 포함하는 폴리펩타이드를 발현시킨 후, 친화 태그를 이용하여 분리 및 정제하는 단계 (단계 3-1))를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 선별방법
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제 16 항에 있어서, 상기 단계 3)은 상기 시그널 펩타이드 태그를 포함하는 폴리펩타이드에 트립신을 처리하는 단계 (단계 3-2))를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 선별방법
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제 16 항에 있어서, 상기 단계 4)는 LC-MS/MS를 이용하여 정량하는 것을 특징으로 하는 선별방법
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