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(a) 신체 조직, 체액, 분비물 및 배설물 중에서 선택된 어느 하나의 샘플로부터 복수의 신경전달물질 및/또는 그의 대사체를 포함하는 분석물질을 분리하는 단계;(b) 상기 분석물질을 에틸클로로포메이트(ethyl chloroformate)를 이용하여 유도체화 반응시켜 복수의 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 유도체를 수득하는 단계;(c) 상기 복수의 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 유도체를 액체크로마토그래피를 이용하여 분리하는 단계; 및(d) 분리된 신경전달물질 또는 그의 대사체의 유도체를 질량분석기를 통해 다중반응검사(Multiple Reaction Monitoring, MRM)를 수행함으로써 복수의 신경전달물질 및/또는 그의 대사체를 동시에 분석하는 단계;를 포함하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제1항에 있어서,상기 신경전달물질 및/또는 그의 대사체는 Tyr(tyrosine), L-DOPA(3,4-dihydroxy-l-phenylalanine), DA(dopamine), DOPAC(3,4-dihydroxyphenylacetic acid), 3-MT(3-methoxytyramine), HVA(homovanillic acid), NE(norepinephrine), EP(epinephrine), NMN(normetanephrine), DHPG(3,4-dihydroxyphenyl glycol), MN(metanephrine), MHPG(3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol), VMA(3-methoxy-4-hydroxymandelic), TA(tyramine), OA(octopamine), Kyn(kynurenine), Trp(tryptophan), 5-HTP(5-hydroxytryptophan), 5-HT(serotonin), 5-HIAA(5-hydroxyindole-3-acetic acid), Gln(glutamine), Glu(glutamate), GABA(γ-aminobutyric acid), 및 ACh (acetylcholine) 중에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제1항에 있어서,단계 (a)는,(a-1) 상기 신체 조직, 체액, 분비물 및 배설물 중에서 선택된 어느 하나의 샘플에 아세트산과 암모늄 아세테이트 수용액을 가하여 추출함으로써 추출물을 수득하는 단계; 및(a-2) 상기 추출물을 원심분리하여 상층액을 분리함으로써 복수의 신경전달물질 및/또는 그의 대사체를 포함하는 분석물질을 분리하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제3항에 있어서,상기 샘플은 뇌 조직 또는 소변 샘플인 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제3항에 있어서,상기 아세트산과 암모늄 아세테이트 수용액은 pH 4 내지 6 인 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제1항에 있어서,단계 (b)에서 상기 유도체화 반응은 상기 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 하이드록시기 및/또는 아민기에 에틸클로로포메이트가 반응하여 치환함으로써 유도체가 형성되는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제1항에 있어서,단계 (b)는,(b-1) 분리된 상기 분석물질에 에탄올과 피리미딘 혼합용액과 에틸클로로포메이트를 첨가하여 유도체화 반응을 수행하는 단계; 및(b-2) 상기 유도체화 반응을 거친 시료에 유기용매를 가하여 액체-액체 추출법으로 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 유도체를 추출하고 농축하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제7항에 있어서,단계 (b-1)에서, 상기 에탄올과 피리미딘 혼합용액은 에탄올:피리미딘 = 90:10 내지 70:30의 중량비로 혼합된 혼합용액인 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제7항에 있어서,단계 (b-1)에서, 상기 에탄올과 피리미딘 혼합용액:에틸클로로포메이트 = 100:5 내지 100:20의 중량비로 첨가하는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제7항에 있어서,단계 (b-1)의 유도체화 반응은 3 내지 10분 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제7항에 있어서,단계 (b-2)에서, 상기 유기용매는 상기 유기용매는 디에틸 에테르, 메틸터부틸 에테르(methyl tert-butyl ether), 에틸 아세테이트, 헥산, 클로로포름, 디클로로메탄, 및 톨루엔 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제7항에 있어서,단계 (c)에서, 상기 액체 크로마토그래피의 이동상은 포름산 수용액, 아세트산 수용액, 및 아세트산과 암모늄 아세테이트의 혼합 수용액 중에서 선택된 어느 하나를 사용하는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제7항에 있어서,단계 (c)에서, 상기 액체 크로마토그래피의 고정상은 C18 컬럼을 사용하는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제7항에 있어서,단계 (c)에서, 상기 액체 크로마토그래피 분석은 3 내지 10분 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제1항에 있어서,단계 (d)에서 상기 다중반응검사(MRM)는 Tyr(tyrosine), L-DOPA(3,4-dihydroxy-l-phenylalanine), DA(dopamine), DOPAC(3,4-dihydroxyphenylacetic acid), 3-MT(3-methoxytyramine), HVA(homovanillic acid), NE(norepinephrine), EP(epinephrine), NMN(normetanephrine), DHPG(3,4-dihydroxyphenyl glycol), MN(metanephrine), MHPG(3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol), VMA(3-methoxy-4-hydroxymandelic), TA(tyramine), OA(octopamine), Kyn(kynurenine), Trp(tryptophan), 5-HTP(5-hydroxytryptophan), 5-HT(serotonin), 5-HIAA(5-hydroxyindole-3-acetic acid), Gln(glutamine), Glu(glutamate), GABA(γ-aminobutyric acid), 및 ACh (acetylcholine) 중에서 선택된 2종 이상에 대하여 동시 분석을 수행하는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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제1항에 있어서,상기 다중반응검사(MRM)는 상기 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 수소이온(H+) 또는 암모늄이온(NH4+)을 탐지함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 신경전달물질 및/또는 그의 대사체의 동시분석법
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