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간 유래 엑소좀을 추출하기 위한 간혈관폐쇄회로 시스템에 있어서,상기 간혈관폐쇄회로를 순환시키기 위한 연동펌프;상기 연동펌프에 의해 상기 간혈관폐쇄회로를 따라 순환되는 엑소좀 순환 미디어 및 플러싱 버퍼;상기 엑소좀 순환 미디어 및 플러싱 버퍼의 순환을 조절하는 스위치를 포함하는 3방향 커넥터;상기 연동 펌프의 투입구를 상기 3방향 커넥터와 연결하고, 상기 연동 펌프의 투출구를 제3 튜빙과 연결하는 제1 튜빙;상기 엑소좀 순환 미디어 및 상기 플러싱 버퍼를 상기 3방향 커넥터와 각각 연결하는 제2 튜빙;개체의 간문맥에 삽입하는 제1 카테터;상기 제1 카테터와 상기 제1 튜빙을 연결하는 제3 튜빙;상기 제1 카테터와 상기 제3 튜빙을 연결하는 제1 커넥터;개체의 하대 정맥에 삽입하는 제2 카테터;상기 제2 카테터와 상기 엑소좀 순환 미디어를 연결하는 제4 튜빙;상기 제2 카테터와 상기 제4 튜빙을 연결하는 제2 커넥터; 및상기 엑소좀 순환 미디어 및 플러핑 버퍼를 산소통과 연결하는 제5 튜빙;을 포함하는, 간혈관폐쇄회로 시스템
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제1항에 있어서,상기 플러싱 버퍼는 항온수조에 담겨 있는 것을 특징으로 하는, 간혈관폐쇄회로 시스템
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제1항에 있어서,상기 엑소좀 순환 미디어 및 상기 플러싱 버퍼는 산소통과 연결되는 것을 특징으로 하는, 간혈관폐쇄회로 시스템
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제2항에 있어서,상기 항온수조는 40℃ 내지 45℃의 온도를 유지하는 것을 특징으로 하는, 간혈관폐쇄회로 시스템
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제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 간혈관폐쇄회로 시스템을 이용하여 간 유래 엑소좀을 추출하는 간 유래 엑소좀 추출 방법에 관한 것으로,개체의 간문맥에 상기 제1 카테터를 삽입하는 단계;상기 연동펌프를 작동시키는 단계;상기 제1 카테터와 상기 펌프에 연결된 제1 커넥터를 체결하는 단계;개체의 하대 정맥에 상기 제2 카테터를 삽입하는 단계;상기 제2 카테터를 제4 튜빙에 연결하고, 상기 제4 튜빙의 다른 끝부분을 상기 엑소좀 순환 미디어 튜브에 연결하는 단계;상기 연동펌프를 중단하고 상기 엑소좀 순환 미디어가 펌프에 공급되도록 상기 3방향 커넥터의 스위치를 돌리는 단계;상기 엑소좀 순환 미디어 및 플러싱 버퍼를 산소통과 연결하는 단계;상기 연동펌프를 다시 작동시켜 상기 엑소좀 순환 미디어를 순환시키는 단계;상기 순환된 엑소좀 순환 미디어를 원심분리하여 상층액을 분리하는 단계;상기 분리된 상층액을 농축하는 단계; 및상기 농축된 상층액으로부터 엑소좀을 분리하는 단계;를 포함하는 간 유래 엑소좀 추출 방법
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제5항에 있어서,상기 엑소좀 순환 미디어를 순환시키는 단계는 30분 내지 90분동안 순환시키는 것을 특징으로 하는, 간 유래 엑소좀 추출 방법
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제5항에 있어서,상기 순환된 엑소좀 순환 미디어를 원심분리하여 상층액을 분리하는 단계는 2,000 x g의 원심력으로 5분 내지 20분, 및 10,000 x g의 원심력으로 30분 내지 60분동안 원심분리기를 작동하는 것을 특징으로 하는, 간 유래 엑소좀 추출 방법
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제5항에 있어서,상기 분리된 상층액을 농축하는 단계는 100 내지 1,000 μl로 membrane 원심분리 농축기(centrifugal concentrator)를 이용하여 원심분리하여 5x109 particle/ml로 농축하는 것을 특징으로 하는, 간 유래 엑소좀 추출 방법
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제5항에 있어서,상기 간 유래 엑소좀을 분리하는 단계는 크기 배제 크로마토그래피(size exclusion chromatography)를 이용하여 분리하는 것을 특징으로 하는, 간 유래 엑소좀 추출 방법
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제5항에 있어서,상기 간 유래 엑소좀은 평균 크기의 분포 영역이 200 nm 이하로 좁아지는 것 혹은 200 nm 이하의 크기를 포함하는 것을 특징으로 하는, 간 유래 엑소좀 추출 방법
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TM4SF5(Transmembrane 4 L6 family member 5) 단백질을 포함하는 엑소좀(exosome)을 함유하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 엑소좀은 간조직, 간조직/세포외액 (liver/extracellular fluid) 간상피세포(hepatocyte) 및 간세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상으로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 엑소좀은 평균 크기의 분포 영역이 200 nm 이하로 좁아지는 것 혹은 200 nm 이하의 크기를 포함하는 엑소좀인 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 엑소좀은 간조직 혹은 간조직/세포외액의 글루코오스 (glucose), 아미노산 (amino acid), 또는 혈청 (serum)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 수준 변화 또는 존재 유무에 따라 분비되는 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서, 상기 엑소좀은 TM4SF5와 GLUT1, GLUT4, 혹은 GLUT9과 결합하는 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서, 상기 엑소좀은 ITGB3(Integrin Subunit Beta 3), FAM49B(amily with sequence similarity 49 member B), ICAM2(Intercellular Adhesion Molecule 2), PKP1(Plakophilin 1), SIRPG(Signal Regulatory Protein Gamma), ITGBL1(Integrin Subunit Beta Like 1)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 단백질을 포함하는 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 엑소좀은 AMPK 또는 ACC의 인산화가 감소하거나, 또는 mTOR, S6K1 또는 AKT의 인산화가 증가하는 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 엑소좀은 근육, 지방 조직 또는 세포의 GLUT4와 결합하거나, 해당작용을 활성화시키거나, 조직/세포외부의 글루코오스 수준에 예민성을 가지게 하거나, 또는 UCP1, mTOR의 인산화를 증가시키는 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 당뇨 관련 질환은 지방간, 지방간염, 당뇨병, 고지혈증, 고혈압, 비만, 미세혈관 손상, 신경 손상, 케톤산혈증, 동맥경화, 심혈관질환 및 뇌혈관질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 질환인 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 엑소좀은 혈당량을 조절하는 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 엑소좀은 근육 세포, 지방 세포, 근육 조직 또는 지방 조직의 혈액 내 포도당 흡수를 촉진하여 항상성(homeostasis)을 조절하는 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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제11항에 있어서,상기 엑소좀은 Glut4의 활성을 필요로 하거나, 혈액 내 포도당 수준을 낮추거나, 세포 내부로의 흡수를 촉진하거나, 열생성(thermogenesis)을 촉진하거나, 또는 혈액 내 포도당 항상성(homeostasis)을 조절하는 것을 특징으로 하는, 당뇨 관련 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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