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세포막 투과성 방법을 이용한 살아있는 세포의 분리 및 배양 방법

  • 기술번호 : KST2019020015
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 말초혈액에서 분리된 말초혈액단핵세포를 포함하는 다양한 세포에 대하여, 세포를 살아있는 상태로 분리 및 배양하는 방법에 관한 것으로, 세포막 투과방법을 이용한다. 본 발명의 방법은 연쇄 구균 용혈 독소를 이용하는바, 연쇄 구균 용혈 독소가 세포막에 존재하고 있는 콜레스테롤에 결합하여 세포막에 구멍을 뚫어 외부 단백질을 세포내로 투과할 수 있게 해주며, 특정 세포질내 단백질을 탐침하여 유세포 분석법 (FACS) 등으로 목적하는 세포를 살아있는 상태로 분리 및 배양할 수 있는 기술이다. 본 발명에 따르면, 여러 조직에서 뿐만 아니라 환자 혈액에서 이전에 분리 배양 할 수 없었던 여러 세포질 내 단백질을 타겟하고 고순도 및 고효율로 균일한 세포를 획득할 수 있으며, 나아가 세포질 내 특정 단백질을 타겟으로 하는 여러 응용 방법 및 다양한 질환의 기전연구와 그 치료에 크게 기여할 수 있을 것으로 기대된다.
Int. CL G01N 33/569 (2017.01.01) G01N 33/58 (2006.01.01) C12N 5/071 (2010.01.01) G01N 15/10 (2006.01.01)
CPC G01N 33/56966(2013.01) G01N 33/56966(2013.01) G01N 33/56966(2013.01) G01N 33/56966(2013.01) G01N 33/56966(2013.01) G01N 33/56966(2013.01)
출원번호/일자 1020180043354 (2018.04.13)
출원인 서울대학교병원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2019-0119868 (2019.10.23) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2018.04.13)
심사청구항수 9

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 서울대학교병원 대한민국 서울특별시 종로구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김효수 서울특별시 용산구
2 양한모 서울특별시 강남구
3 이주은 서울특별시 송파구
4 김주영 경기도 수원시 장안구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이명진 대한민국 서울특별시 강남구 영동대로**길 ** (대치동) 성원타워 *층(명진 국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 서울대학교병원 서울특별시 종로구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2018.04.13 수리 (Accepted) 1-1-2018-0370648-12
2 보정요구서
Request for Amendment
2018.04.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2018-0064387-49
3 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment
2018.04.26 수리 (Accepted) 1-1-2018-0417821-51
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2018.06.11 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2018.08.07 수리 (Accepted) 9-1-2018-0038967-26
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2019.05.13 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0338351-09
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2019.07.11 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2019-0710750-93
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2019.07.11 수리 (Accepted) 1-1-2019-0710751-38
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.08.19 수리 (Accepted) 4-1-2019-5164229-95
10 등록결정서
Decision to grant
2019.11.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0852837-09
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번호 청구항
1 1
(s1) 대상 세포를 포함하는 시험 물질에 연쇄 구균 용혈 독소(Streptolysin O, SLO)를 5 U/ml 이하의 농도로 처리하는 단계; (s2) 대상 세포의 세포질내 타겟 단백질에 대한 항체를 처리하는 단계; 및(s3) 상기 항체에 양성반응을 보이는 살아있는 상태의 대상 세포를 분리하는 단계를 포함하는, 살아있는 상태로 대상 세포를 분리하는 방법으로서, 상기 대상 세포는 말초혈액단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC), 골격 근아세포(skeletal myoblast, SMB), 연근육 세포(smooth muscle cell, SMC) 또는 인간 역분화 줄기세포인 것을 특징으로 하는 방법
2 2
삭제
3 3
제1항에 있어서, 상기 (s1) 단계에서, 연쇄 구균 용혈 독소(Streptolysin O, SLO) 처리 농도는 2
4 4
제1항에 있어서, 상기 (s2) 단계에서, 세포질내 타겟 단백질은 대상 세포의 마커 단백질인 것을 특징으로 하는, 방법
5 5
제4항에 있어서, 상기 대상 세포의 마커 단백질은 칼포닌(Calponin), 평활근(Smooth Muscle Actin, SMA), NFATc1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1) 및 덱스트란(dextran)을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법
6 6
제4항에 있어서, 상기 대상 세포의 마커 단백질은 인간 역분화 줄기세포의 NANOG 또는 심근세포의 Tom20인 것을 특징으로 하는, 방법
7 7
(s1) 대상 세포를 포함하는 시험 물질에 연쇄 구균 용혈 독소(Streptolysin O, SLO)를 5 U/ml 이하의 농도로 처리하는 단계; (s2) 대상 세포의 세포질내 타겟 단백질에 대한 항체를 1차 항체로 처리하고 형광 색소가 결합된 2차 항체를 처리하는 단계; 및(s3) FACS (Fluorescence-activated cell sorting) 분석 방법을 통해 상기 항체에 양성반응을 보이는 대상 세포를 확인하고 분리하는 단계를 포함하는, 살아있는 상태로 대상 세포를 분리하는 방법으로서, 상기 대상 세포는 말초혈액단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC), 골격 근아세포(skeletal myoblast, SMB), 연근육 세포(smooth muscle cell, SMC) 또는 인간 역분화 줄기세포인 것을 특징으로 하는 방법
8 8
삭제
9 9
삭제
10 10
제7항에 있어서, 상기 형광 색소가 결합된 2차 항체의 크기가 150kDa 이하인 것을 특징으로 하는, 방법
11 11
제7항에 있어서, 상기 형광 색소는 FITC, PE, Alexa Fluor 488, DyLight 488, PerCP, PerCP-Cy5
12 12
제1항 또는 제7항에 있어서, 대상 세포를 염화칼슘(CaCl2)가 첨가된 세포배양물에 현탁하여 세포막을 재생하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법
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1 US20190316092 US 미국 FAMILY

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