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개의 TP53 유전자 표적 CRISPR/Cas9 벡터 시스템 및 이를 이용한 TP53 넉아웃 세포

  • 기술번호 : KST2020013195
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9 시스템을 활용하여 개 모델에서 대표적인 종양 억제 유전자인 TP53 유전자를 특이적으로 표적하는 기술과 이를 적용하여 구축한 TP53 넉아웃 (knock-out) 개 세포주 및 이를 종양 연구에 활용하는 기술에 관한 것이다. 본 발명의 가이드 RNA (gRNA)는 개의 TP53 유전자만을 특이적으로 표적할 수 있는바, 이러한 특정 gRNA를 CRISPR/Cas9 시스템에 도입하는 경우 오프-타겟 효과(off-target effect) 없이 개의 TP53 유전자를 특이적으로 넉아웃(knock-out) 시킬 수 있다. 따라서, 개의 TP53 유전자를 특이적으로 표적하는 gRNA가 적용된 CRISPR/Cas9 시스템은 TP53 신호체계 불활성화와 관련된 다양한 종양 관련 연구를 위한 개 세포 모델과 동물모델을 제작하는데 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 개 TP53 유전자-특이적 CRISPR/Cas9 시스템으로 구축한 TP53 넉아웃 세포는 개의 종양과 관련된 다양한 종양유전자의 종양 생성 및 악성화 기전연구를 위한 연구 모델과 이와 관련한 항암제 테스트 모델로 활용할 수 있다.
Int. CL C12N 15/85 (2006.01.01) C12N 9/22 (2006.01.01) C12N 15/90 (2006.01.01) A01K 67/027 (2006.01.01) G01N 33/50 (2017.01.01)
CPC C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01) C12N 15/8509(2013.01)
출원번호/일자 1020190056396 (2019.05.14)
출원인 고려대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-2159317-0000 (2020.09.17)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20200924) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2019.05.14)
심사청구항수 15

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 은기영 서울특별시 동대문구
2 김형기 경기도 용인시 수지구
3 정연우 서울특별시 영등포구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인 남앤남 대한민국 서울특별시 중구 서소문로 ** (서소문동, 정안빌딩 *층)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2019.05.14 수리 (Accepted) 1-1-2019-0492265-02
2 보정요구서
Request for Amendment		 2019.05.15 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2019-0080888-11
3 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2019.05.31 수리 (Accepted) 1-1-2019-0560031-54
4 [출원서 등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2019.06.28 수리 (Accepted) 1-1-2019-0662739-29
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.10.10 수리 (Accepted) 4-1-2019-5210941-09
6 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2020.02.14 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
7 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2020.03.17 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2020-0046487-75
8 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2020.04.16 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0269890-13
9 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견서·답변서·소명서
 2020.05.28 수리 (Accepted) 1-1-2020-0543075-22
10 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2020.05.28 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0543076-78
11 등록결정서
Decision to grant		 2020.08.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0563851-51
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번호 청구항
1 1
서열번호 1의 염기서열로 표시되는 가이드 RNA(guide RNA); 및 Cas 단백질을 암호화하는 유전자를 포함하는, 개의 TP53 유전자 타겟팅용 재조합 벡터
2 2
제1항에 있어서,상기 Cas 단백질은 서열번호 27의 아미노산 서열로 표시되는 Cas9 단백질인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
3 3
제1항에 있어서,상기 Cas 단백질은 NGG 트리뉴클레오타이드(trinucledotide)와 도입한 가이드 RNA 서열에 상보적인 염기서열을 인식하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
4 4
제1항에 있어서,상기 벡터는 형광단백질을 코딩하는 유전자를 더 포함하는 재조합 벡터
5 5
제1항의 재조합 벡터가 도입된, 형질전환 세포주
6 6
제5항에 있어서,상기 세포주는 종양유전자 과발현 벡터가 추가로 도입된, 형질전환 세포주
7 7
제6항에 있어서,상기 종양유전자는 RAS 유전자인 것을 특징으로 하는, 형질전환 세포주
8 8
제5항에 있어서,상기 세포주는 개의 종양형성 세포 모델인 것을 특징으로 하는, 형질전환 세포주
9 9
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 재조합 벡터를 개 유래 세포에 도입하는 단계를 포함하는, 형질전환 세포주 제조방법
10 10
제9항에 있어서,상기 세포는 개 유래의 접합체(zygote), 섬유아세포, 신경계 세포, 피부세포 또는 성체줄기세포인 것을 특징으로 하는, 형질전환 세포주 제조방법
11 11
제5항 내지 제8항 중 어느 한 항의 세포주에 항암제 후보물질을 처리하는 단계; 및상기 후보물질을 처리한 세포주를 후보물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 후보물질에 의해 종양형성이 개선되거나 치료되는 경우 이를 항암제로 판단하는 단계를 포함하는, 항암제의 스크리닝 방법
12 12
제5항 내지 제8항 중 어느 한 항의 세포주가 이식되어 종양이 형성된, 인간을 제외한 종양형성 동물모델
13 13
제12항에 있어서,상기 동물모델은 개의 TP53 유전자가 넉아웃된 것을 특징으로 하는, 인간을 제외한 종양형성 동물모델
14 14
제5항 내지 제8항 중 어느 한 항의 세포주를 동물의 피하에 이식하는 단계를 포함하는, 인간을 제외한 종양형성 동물모델 제조방법
15 15
제12항의 동물모델에 항암제 후보물질을 투여하는 단계; 및상기 후보물질을 투여한 동물모델을 후보물질을 투여하지 않은 대조군과 비교하여 후보물질에 의해 종양형성이 개선되거나 치료되는 경우 이를 항암제로 판단하는 단계를 포함하는, 항암제의 스크리닝 방법
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1 농림축산식품부 (재)수암생명공학연구원 농생명산업기술개발사업 유전자 재조합 기법을 활용한 형질전환 흑색종 질환 모델견 개발
2 동물바이오신약장기개발사업단 고려대학교 차세대바이오그린21사업 신경종양과 알츠하이머 유전자 발현 시스템과 핵치환용 형질전환 체세포주 개발