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하기 단계를 포함하는, 광활성화 티로시나아제의 제조 방법:(a) 티로시나아제의 활성 부위에 존재하는 구리 이온으로부터 6 Å 이내의 아미노산 또는 상기 티로시나아제에 도킹된 기질로부터 6 Å 이내에 존재하는 아미노산을 선정하는 단계;(b) 단계 (a) 에서 선정된 아미노산의 위치에, 광반응성 작용기를 갖는 아미노산이 도입된 돌연변이 티로시나아제 라이브러리를 얻는 단계; 및(c) 단계 (b) 에서 얻어진 돌연변이 티로시나아제 라이브러리로부터, UV 를 조사한 경우 티로시나아제 활성이 나타나는 광활성화 티로시나아제를 선별하는 단계
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제 1 항에 있어서, 단계 (b) 가, 하기 단계 (b-1) 내지 (b-3) 중 어느 하나의 단계를 포함하는, 방법:(b-1) 상기 단계 (a) 에서 선정된 아미노산을 광반응성 작용기를 갖는 아미노산으로 치환하는 단계;(b-2) 상기 단계 (a) 에서 선정된 아미노산을, 케톤, 아자이드, 알킨, 알켄, 및 테트라진으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 측쇄를 함유하는 비천연 아미노산으로 치환하고, 치환된 아미노산 서열을 갖는 티로시나아제를, 광반응성 작용기를 포함하는 화합물과 반응시키는 단계; 또는(b-3) 상기 단계 (a) 에서 선정된 아미노산을, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 글루탐산, 아스파르트산, 시스테인 및 티로신으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 아미노산으로 치환하고, 치환된 아미노산 서열을 갖는 티로시나아제를, 광반응성 작용기를 포함하는 화합물과 반응시키는 단계
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제 2 항에 있어서, 상기 단계 (b-1) 및 (b-2) 는 하기 단계를 포함하는 방법:- 티로시나아제를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열에서, 상기 단계 (a) 에서 선정된 아미노산을 암호화하는 코돈 중 어느 하나를 종결코돈으로 변경하는 단계; 및- 변경된 코돈을 갖는 돌연변이 티로시나아제를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 (i), 및 서프레서 tRNA 를 암호화하는 폴리뉴클레오티드와 tRNA 충전 효소를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 (ii) 를 미생물 균주 내에 도입하는 단계
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제 3 항에 있어서, 상기 서프레서 tRNA 는 하기 중 어느 하나의 특징을 갖는, 방법:- 단계 (b) 가 단계 (b-1) 을 포함하는 경우, 상기 서프레서 tRNA 는 종결코돈에 대응하는 안티코돈 및 광반응성 작용기를 갖는 아미노산을 포함함;- 단계 (b) 가 단계 (b-2) 를 포함하는 경우, 상기 서프레서 tRNA 는 종결코돈에 대응하는 안티코돈 및 케톤, 아자이드, 알킨, 알켄, 및 테트라진으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 측쇄를 함유하는 비천연 아미노산을 포함함
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제 2 항에 있어서, 상기 단계 (b-1) 의 광반응성 작용기를 갖는 아미노산이 리신, 티로신, 시스테인, 및 페닐알라닌으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산과 광반응성 작용기를 포함하는 화합물의 반응 생성물인, 방법
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제 2 항에 있어서, 상기 단계 (b-2) 의 광반응성 작용기를 포함하는 화합물이, 알콕시 아민, 아자이드, 알킨, 스트레인드 알킨(strained alkyne), 디벤조사이클로옥틴(dibenzocyclooctyne), 바이사이클로노닌(bicyclononyne), 트랜스사이클로옥틴(transcyclooctyne), 스트레인드 알켄(strained alkene), 시클로프로펜, 시클로옥텐, 노르보르넨(norbornene), 및 테트라진(tetrazine)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 결합성 작용기로서, 상기 단계 (b-2)의 측쇄와 반응 가능한 결합성 작용기를 갖는 화합물인, 방법
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제 2 항에 있어서, 상기 단계 (b-3) 의 광반응성 작용기를 포함하는 화합물이, N-하이드록시숙신이미드 (N-hydroxysuccinimide, NHS), 이소티오시아네이트 (isothiocyanate), 디알킬 아실 페닐렌디아민(dialkyl acyl phenylenediamine), N-에틸-3-N',N'-디메틸아미노프로필카르보디이미드(N-ethyl-3-N',N'-dimethylaminopropylcarbodiimide, EDC), 말레이미드(maleimide), 이소시아네이트(isocyanate), 클로라이드(chloride), 브로마이드(bromide), 및 요오다이드(iodide) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 결합성 작용기로서, 상기 단계 (b-3) 의 치환된 아미노산과 반응 가능한 결합성 작용기를 갖는 화합물인, 방법
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제 1 항에 있어서, 광반응성 작용기가 니트로벤질기, 니트로페네틸, 니트로인돌린기, 쿠마린기, 아지도벤질기, 니트로피페로닐기, 니트로페닐프로필기, 아조벤젠기, 2-디아조-1,2-나프토퀴논, 스피로파이란, 메타아크릴레이트 및 펜타플루오로-아조벤젠기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법
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제 1 항에 있어서, 상기 티로시나아제가 스트렙토미세스 (Streptomyces) 또는 바실러스 (Bacillus) 유래의 티로시나아제인, 방법
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제 3 항에 있어서, 미생물 균주는 대장균 (Escherichia coli), 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae), 바실러스 서브틸리스 (Bacillus subtilis), 및 코리네박테리움 글루타미쿰 (Corynebacterium glutamicum) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법
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제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조되는 광활성화 티로시나아제
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서열번호 1 의 아미노산 서열에서, 41 번째 이소루신 또는 183 번째 트립토판의 위치에 광반응성 작용기를 갖는 아미노산이 도입된, 광활성화 티로시나아제
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서열번호 2 의 아미노산 서열에서, 46 번째 글리신의 위치에 광반응성 작용기를 갖는 아미노산이 도입된, 광활성화 티로시나아제
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제 12 항 또는 제 13 항에 있어서, 광반응성 작용기가 니트로벤질기, 니트로페네틸, 니트로인돌린기, 쿠마린기, 아지도벤질기, 니트로피페로닐기, 니트로페닐프로필기, 아조벤젠기, 2-디아조-1,2-나프토퀴논, 스피로파이란, 메타아크릴레이트 및 펜타플루오로-아조벤젠기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 광활성화 티로시나아제
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제 11 항의 광활성화 티로시나아제를 포함하는, 리포솜 조성물
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제 15 항에 있어서, 0
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제 15 항에 있어서, 경피에 투여되는, 리포솜 조성물
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제 15 항에 있어서, 자외선 차단용 화장료 조성물인, 리포솜 조성물
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제 15 항에 있어서, 리포솜의 입자 크기가 100 내지 200 nm인, 리포솜 조성물
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제 15 항에 있어서, 리포솜이 스테롤과 인지질을 1:9 내지 3:7 의 비율로 포함하는 것인, 리포솜 조성물
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제 20 항에 있어서, 스테롤은 캄페스테롤(campesterol), 시토스테롤(sitosterol), 스티그마스테롤(stigmasterol), 콜레스테롤(cholesterol), 및 에르고스테롤(ergosterol) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 리포솜 조성물
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제 20 항에 있어서, 인지질은 디스테아로일포스파티딜콜린 (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine, DSPC), 디스테아로일포스포에타놀아민 (1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, DSPE), 디올레오일포스포에타놀아민 (1,2-dileoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, DOPE), 디올레오일포스포콜린 (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린 (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine, DPPC), 디미리스토일포스포에타놀아민 (1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, DMPE), 디라우로일포스포글리세롤 (1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphoglycerol, DLPG), 디라우로일포스포에타놀아민 (1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphoehtanolamine, DLPE), 및 디라우로일포스포콜린 (1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DLPC) 으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 리포솜 조성물
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제 11 항의 광활성화 티로시나아제를 포함하는, 하이드로젤 합성용 생촉매 조성물
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