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혈전용해효소 p1 을 코드화하는 하기 서열의 cDNA 유전자 LK7T1(등록번호 U25645)
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혈전용해효소 P2 를 코드화하는 하기 서열의 cDNA 유전자 LKP2 (등록번호 U36338)
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3
혈전용해효소 P3 를 코드화하는 하기 서열의 cDNA 유전자 LK3(1) (등록번호 U25648)
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4
혈전용해효소 P4 를 코드화하는 하기 서열의 cDNA 유전자 LKDa2 (등록번호 U25647)
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5
혈전용해효소 P6 를 코드화하는 하기 서열의 cDNA 유전자 LK7T2 (등록번호 U25646)
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6
혈전용해효소 P7 을 코드화하는 하기 서열의 cDNA 유전자 LKlT4 (등록번호 U25643)
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7
음이온 교환 컬럼 크로마토그래피, 소수성 결합 컬럼 크로마토그래피, 벤자미딘을 리간드로 사용하는 친화성 크로마토그래피 및 리마빈 트립신 억제제(Lima Bean Trypsin Inhibitor;LBTI)를 리간드로 사용하는 친화성 크로마토그래피의 조합에 의하여 구인(Earthworm)의 조추출물로 부터 혈전용해활성을 갖는 효소 P1, P2, P3, P4, P6, 및 P7 을 분리, 정제하는 방법
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8
제 7 항에 있어서, 음이온 교환 컬럼이 DEAE Toyopearl-650(s) 인 방법
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9
제 7 항에 있어서, 소수성 결합 컬럼이 페닐-세파로오스를 사용한 것인 방법
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10
제 7 항에 있어서, 구인이 붉은 지렁이 룸브리쿠스 루벨루스(Lumbricus rubellus) 인 방법
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11
제 7 항 내지 10 항 중의 어느 한 항에 있어서, (a) 구인의 조추출물을 DEAE Toyopearl-650(s) 컬럼에 적용하여 혈전용해활성을 갖는 여섯가지 분획 D(I), D(II), D(III), D(IV), D(V) 및 D(VI) 를 얻고, (b) (a) 에서 수득한 분획 D(I) 및 D(II) 를 각각 페닐-세파로오스 소수성 결합컬럼에 적용하여 P1 및 P2 단백질 분획을 얻는 한편, 분획 D(III), D(V), D(VI) 를 각각 벤자미딘-친화성 컬럼에 적용하고 흡착된 성분을 1M 아르기닌 용액으로 용출시켜 순수하게 정제된 P3 및 IT7 단백질 분획을 얻으며, (c) (b) 에서 수득한 P1 및 P2 단백질 분획을 LBTI-친화성 쟐럼에 적용하고 흡착된 성분을 pH 쇼크에 의해 용출시켜 순수하게 정제된 P1 및 P2 단백질 분획을 얻고, (d) (b) 과정에서 D(III) 및 D(V) 분획을 벤자미딘-친화성 컬럼에 적용하였을때 비흡착된 분획을 각각 LBTI-친화성 컬럼에 적용하여 P4 및 P6 단백질 분획을 얻음으로써 혈전용해활성을 갖는 효소 P1, P2, P3, P4, P6 및 P7을 분리, 정제하는 방법
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12
제 7 항에 있어서, 구인의 조추출물이 구인의 분쇄액을 30% 암모늄설페이트로처리하여 침전물을 제거하고 여기서 얻어진 상등액을 다시 60% 암모늄설페이 트로 처리하여 활성단백질이 포함되어 있는 침전물을 얻음으로써 제조된 것인 방법
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13
벤자미딘을 리간드로 사용하는 친화성 크로마토그래피 및 리마빈 트립신 억제제(LBTI)를 리간드로 사용하는 친화성 크로마토그래피를 순차적으로 수행하여 구인 (Lumbricus rubellus)의 조추출물로 부터 혈전용해활성을 갖는 효소 P1, P2, P3, P4, P6 및 P7 을 분리, 정제하는 방법
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14
제 13 항에 있어서, (a) 구인의 조추출물을 벤자미딘-친화성 컬럼에 적용하여 흡착된 성분으로 부터 순수하게 정제된 P3 및 P7 단백질 분획을 수득하고, (b) (a) 과정에서 비흡착에 된 분획을 합해서 LBTI-친화성 컬럼에 적용하고 LBTI 대한 친화정도에 따라 순수하게 정제된 P1, P2, P4 및 P6 단백질 분획을 수득함으로써 혈전용해활성을 갖는 효소 P1, P2, P3, P4, P6, P7 을 분리, 정제하는 방법
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15
제 14 항에 있어서, (b)과정에서 얻어진 단백질 분획이 다른 단백질과 일부 혼합된 상태로 용출되는 경우 다시 합하여 LBTI-친화성 컬럼에 적용하는 과정을 반복함으로써 분리, 정제하는 방법
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제 14 항 또는 15 항에 있어서, 벤자미딘-친화성 컬럼 크로마토그래피에서 1M NaCl 을 함유하는 50mM 아세트산나트륨 용액(pH 5
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17
제 14 항 또는 15 항에 있어서, LBTI-친화성 컬럼 크로마토그래피에서 1M NaCl 을 함유하는 50mM 아세트산나트륨 용액(pH 5
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