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1) 말토오스 결합 단백질(maltose binding protien, MBP)의 카르복실 말단에 생리활성 폴리펩타이드가 융합된 융합 단백질을 얻는 단계; 및
2) 상기 융합 단백질을 말토오스 결합 단백질의 표면에 노출된 소수성 도메인을 포함하는 아미노 말단과 소수성 표면과의 물리적 흡착에 의해 소수성 표면에 고정시키는 단계를 포함하는, 생리활성 폴리펩타이드의 고정화 방법
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제1항에 있어서,
단계 1)에서 융합 단백질이
(i) 목적하는 생리활성 폴리펩타이드가 말토오스 결합 단백질의 카르복실 말단에 융합된 융합 단백질을 암호화하는 융합 유전자 단편을 얻는 단계;
(ii) 상기 융합 유전자 단편을 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계;
(iii) 상기 발현벡터로 형질전환된 형질전환 미생물을 제조하는 단계; 및
(iv) 상기 형질전환 미생물로부터 융합 단백질을 발현 및 정제하는 단계에 의해 얻어지는 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제2항에 있어서,
단계 (ii)에서 발현벡터가 대장균용 발현벡터인 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제2항에 있어서,
단계 (iii)에서 미생물이 대장균인 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제2항에 있어서,
단계 (iv)에서 융합 단백질이 말토오스 특이적인 친화 크로마토그래피(affinity chromatography)를 이용하여 정제되는 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제1항에 있어서,
단계 2)에서 소수성 표면이 실란화된 표면(silanized surface), 탄화수소 코팅된 표면(hydrocarbon coated surface), 고분자 표면 또는 금속 표면인 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제6항에 있어서,
상기 고분자가 폴리스티렌, 폴리카보네이트, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 테플론, 폴리테트라플루오로에틸렌, 및 폴리에스터 함유 생분해성 고분자로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제6항에 있어서,
상기 금속이 스테인레스 스틸, 티탄, 금 및 백금으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제1항에 있어서,
단계 2)에서 물리적 흡착이 융합 단백질과 소수성 표면을 4 내지 25℃에서 1 내지 24시간 동안 반응시켜 이루어지는 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제1항에 있어서,
단계 2)에서 융합 단백질 형태로 소수성 표면에 고정된 생리활성 폴리펩타이드가 소수성 표면의 외부로 향하게 노출되는 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제1항에 있어서,
단계 2)에서 융합 단백질 형태로 소수성 표면에 고정된 생리활성 폴리펩타이드가 본래의 생물학적 활성 또는 기능을 50% 이상 유지하는 것을 특징으로 하는 고정화 방법
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제1항의 고정화 방법에 의해 생리활성 폴리펩타이드가 말토오스 결합 단백질을 링커로 이용하여 소수성 표면에 고정되어 있는 생물활성 표면(bioactive surface)
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제12항에 있어서,
상기 생물활성 표면이 세포 배양, 줄기세포 분화, 조직공학, 진단 장비, 바이오센서(biosensor), 고-성능 스크리닝(high-throughput screening), 고상 추출(solid phase extraction) 또는 크로마토그래피 정제에 활용되는 것을 특징으로 하는 생물활성 표면
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