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앱타머의 증폭을 이용한 세포 검출법

  • 기술번호 : KST2015131726
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 세포의 검출법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 자석비드 (magnetic bead)에 세포 결합 항체 및 목적 세포를 순차적으로 결합시키고 자력에 의해 분리한 후, 세포 결합 앱타머를 상기 세포에 결합시키고 이를 자력에 의해 분리한 다음, 상기 세포 결합 앱타머를 탈리 및 증폭시켜 그 양을 실시간 중합효소 연쇄반응 (real time polymerase chain reaction)으로 분석하는 방법에 관한 것이다. 앱타머는 분석 대상에 강한 친화도를 가지고 항체에 비해 열안정성이 뛰어나며, 실시간-PCR은 상대적으로 작은 양을 정량화할 수 있어 결합의 특이성 및 분리의 신속성을 개선하고, 검출의 민감도와 정확성을 제고함으로써, 세포 자체를 측정하는 대신 세포 내부의 성분을 측정하고 이로부터 세포의 양을 간접적으로 파악하는 종래 검출법의 단점을 극복할 수 있다.검출, 자석비드, 실시간-PCR, 앱타머, 항체
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/563 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
CPC C12N 15/115(2013.01) C12N 15/115(2013.01) C12N 15/115(2013.01) C12N 15/115(2013.01) C12N 15/115(2013.01)
출원번호/일자 1020080138659 (2008.12.31)
출원인 고려대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1132755-0000 (2012.03.27)
공개번호/일자 10-2010-0080042 (2010.07.08) 문서열기
공고번호/일자 (20120424) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2008.12.31)
심사청구항수 12

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 오민규 대한민국 서울특별시 강남구
2 김중배 대한민국 서울특별시 강남구
3 김영근 대한민국 서울특별시 강남구
4 이혜진 대한민국 경기도 안산시 상록구
5 김경우 대한민국 서울특별시 성동구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인주원 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, *층(논현동, 건설회관)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2008.12.31 수리 (Accepted) 1-1-2008-0911179-55
2 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2009.01.05 수리 (Accepted) 1-1-2009-0002582-11
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2009.06.09 수리 (Accepted) 4-1-2009-5111177-32
4 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2010.05.04 수리 (Accepted) 1-1-2010-0289090-70
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2010.08.12 수리 (Accepted) 4-1-2010-5149278-93
6 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2011.01.25 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
7 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2011.02.14 수리 (Accepted) 9-1-2011-0007469-22
8 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.02.17 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0091876-98
9 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2011.04.18 수리 (Accepted) 1-1-2011-0285907-18
10 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2011.05.17 수리 (Accepted) 1-1-2011-0365334-11
11 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2011.06.17 수리 (Accepted) 1-1-2011-0459764-67
12 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2011.07.18 수리 (Accepted) 1-1-2011-0550494-03
13 지정기간연장관련안내서
Notification for Extension of Designated Period		 2011.07.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2011-0064951-38
14 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.08.17 수리 (Accepted) 1-1-2011-0636693-76
15 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.08.17 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0636716-38
16 등록결정서
Decision to grant		 2012.03.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0173334-00
17 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.11 수리 (Accepted) 4-1-2014-5018243-16
18 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.04.22 수리 (Accepted) 4-1-2014-5049934-62
19 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.10.10 수리 (Accepted) 4-1-2019-5210941-09
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번호 청구항
1 1
(A) 자석비드 (magnetic bead)와 세포 결합 항체를 혼합하여, 상기 세포 결합 항체가 상기 자석비드의 표면에 결합된 항체-자석비드를 제조하는 단계; (I) 상기 단계 (A)에서 제조된 항체-자석비드를 자력으로 분리하고 세척하는 단계; (B) 상기 항체-자석비드를 세포가 함유된 피시험 용액에 첨가하여, 상기 세포가 상기 항체-자석비드의 상기 세포 결합 항체에 결합된 세포-항체-자석비드를 제조하는 단계; (C'') 상기 피시험 용액과 상기 세포-항체-자석비드를 자력으로 분리하고, 상기 세포-항체-자석비드를 세척하는 단계; (D) 상기 세포-항체-자석비드와 세포 결합 앱타머를 혼합하여, 상기 세포 결합 앱타머가 상기 세포-항체-자석비드의 세포에 결합된 앱타머-세포-항체-자석비드를 제조하는 단계; (E) 상기 세포-항체-자석비드의 세포에 결합되지 않은 미반응 세포 결합 앱타머를 제거하는 단계; (F) 상기 앱타머-세포-항체-자석비드의 세포 결합 앱타머를 탈리시키는 단계; 및 (G) 상기 탈리된 세포 결합 앱타머를 실시간 중합효소 연쇄반응 (real time polymerase chain reaction)으로 증폭시킨 후 정량분석하는 단계를 포함하고, 상기 세포 결합 항체와 상기 자석비드의 결합은 스트렙타비딘(streptavidin)-바이오틴(biotin) 결합, 아비딘(avidin)-바이오틴 결합, EDC (ethyl-3-dimethyl-aminopropyl carbodiimide) 커플링, 설프하이드릴아민(sulphhydrylamine) 커플링, 또는 Ni-NTA(nitrilotriacetic acid)-히스티딘 결합에 의해 이루어지고, 상기 자석비드는 표면에 중성 카르복시기(-COOH), 그의 이온(-COO-), 중성 아민기(-NH2), 그의 이온(-NH- 또는 -NH3+), 중성 티올기(-SH), 및 그의 이온(-S-)으로 이루어진 군에서 선택된 작용기를 구비한 것을 특징으로 하는 세포 검출법
2 2
청구항 1에 있어서, 상기 단계 (A) 이후 단계 (B) 이전에, (H) 상기 항체-자석비드 중 자석비드 표면의 미반응 결합부위를 보호하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 검출법
3 3
삭제
4 4
삭제
5 5
청구항 2에 있어서, 상기 단계 (A) 이후 단계 (H) 이전에, (I) 상기 단계 (A)에서 제조된 항체-자석비드를 자력으로 분리하고 세척하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 검출법
6 6
삭제
7 7
청구항 1, 청구항 2 또는 청구항 5 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 세포는 대장균, 박테리아, 암세포, 분화세포, 또는 암줄기세포인 것을 특징으로 하는 세포 검출법
8 8
청구항 1, 청구항 2 또는 청구항 5 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 앱타머는 그 서열을 구성하는 염기의 수가 50 내지 250 개인 것을 특징으로 하는 세포 검출법
9 9
삭제
10 10
청구항 1, 청구항 2 또는 청구항 5 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 단계 (A) 이전에, (J) 자석비드와 EDC (ethyl-3-dimethyl-aminopropyl carbodiimide) 용액을 혼합하여 반응시킨 후, 상기 자석비드를 자력으로 고정시키고, 미반응 EDC 용액을 제거하는 단계를 추가로 포함한 것을 특징으로 하는 세포 검출법
11 11
청구항 1에 있어서, 상기 단계 (I)의 세척은 완충액으로 수행하는 것을 특징으로 하는 세포 검출법
12 12
청구항 5에 있어서, 상기 단계 (I)의 세척은 완충액으로 수행하는 것을 특징으로 하는 세포 검출법
13 13
청구항 1에 있어서, 상기 단계 (C'')의 세척은 완충액으로 수행하는 것을 특징으로 하는 세포 검출법
14 14
청구항 1, 청구항 2 또는 청구항 5 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 세포는 대장균인 것을 특징으로 하는 세포 검출법
15 15
청구항 14에 있어서, 상기 앱타머는 서열 5''- GGG AGA GCG GAA GCG UGC UGG GUC GCA GUU UGC GCG CGU UCC AAG UUC UCU CAU CAC GGA AUA CAU AAC CCA GAG GUC GAU-3''의 대장균 특이성 RNA 앱타머인 것을 특징으로 하는 세포 검출법
16 16
청구항 1, 청구항 2 또는 청구항 5 중 어느 한 청구항에 있어서, 상기 단계 (G)의 정량분석은 앱타머의 문턱주기 (threshold cycle)와 앱타머 양, 및 상기 앱타머 양과 세포 수 사이의 상관관계를 이용한 것을 특징으로 하는 세포 검출법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육과학기술부/한국연구재단 고려대학교/고려대학교 산학협력단 미래유망 융합기술 파이오니어사업/해외우수연구기관유치사업 자성천이와 영속발광 특성을 갖는 복합기능 마그네틱-포토닉 나노결정을 활용한 바이오메디컬혁신기술개발/[2단계1차]바텔연구소 유치활용을통한 급성 호흡기 감염 및 중증 패혈증 조기진단용나노바이오 시스템 개발