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세포배지에 나노물질을 노출시키는 단계;2이상의 선택적 평면 조사 현미경(Selective Plane Illumination Microcopy, SPIM)을 이용하여 상기 세포배지 내 분산된 나노물질의 수와 크기를 측정하는 단계;상기 측정결과를 이용하여 나노물질의 세포에 대한 영향을 분석하는 단계를 포함하고,상기 나노물질의 세포에 대한 영향 분석은 세포배지 내 나노물질의 응집 및 침전계수 계산, 세포 내 나노물질의 축적량 계산, 및 세포사멸과의 연관성 확인을 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 나노물질 위해성 실시간 평가방법
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제1항에 있어서, 상기 SPIM의 이용은IRIS 및 슬릿(slit)에 의한 레이저 빔 두께의 1차 감소;실린더 렌즈(cylinderical lens)에 의한 판 모양으로의 빔 형태 변형;대물렌즈(objective lens)에 의한 빔 두께의 2차 감소에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 세포배지 내 분산된 나노물질의 수의 측정은나노물질 이미지 분석을 통해 실시간으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법
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제4항에 있어서, 상기 나노물질 이미지 분석은 동영상 또는 연속촬영된 사진을 이용하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 세포배지 내 분산된 나노물질의 크기의 분석은나노물질의 브라운 운동에 따른 확산계수 D를 이용하는 것을 특징으로 하는 방법:이 때, k는 볼츠만 상수, T는 온도, η는 용액의 점도, r은 나노물질의 반지름이다
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제1항에 있어서, 상기 세포배지 내 나노물질의 응집 및 침전계수 계산은PLS(parallel light sheet) 모드의 SPIM을 이용하여 2이상의 시료높이에서의 나노물질 농도 및 크기분포를 측정함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 세포 내 나노물질의 축적량 계산을 위해PLS(parallel light sheet) 모드의 SPIM; 및 HILO(Highly inclined and laminated optical sheet) 모드 또는 TIR(Total internal reflection) 모드의 SPIM의 조합을 이용하는 것을 특징으로 하는 방법
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제9항에 있어서, 상기 세포 내 나노물질의 축적량 계산은실제 노출된 나노물질의 농도 및 크기분포; 및 세포 내 축적된 나노물질의 농도 및 크기분포를 측정함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 세포사멸과의 연관성 확인은 흡광염색법 또는 형광염색법을 이용한 염색법으로 세포 사멸 정량분석 결과와 세포 내 나노물질의 축적량 계산결과를 조합하여 분석함으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법
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제11항에 있어서, 상기 흡광염색은 MTT(3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)), MTS(5-(3-caroboxymethoxyphenyl)-2H-tetra-zolium inner salt), WST(4-[3-(4-Iodophenyl)-2(4-nitrophenyl)-2H-5-tetrazolio]1,3-benzene disulfonate) 및 트립판 블루(trypanblue)로 이루어진 군으로부터 선택되는 흡광염료를 이용하여 수행되고, 상기 형광염색은 유기형광 염료, 무기나노입자 또는 형광단백질을 이용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 SPIM은 나노물질 노출장치에 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법
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제13항에 있어서, 상기 나노물질 노출장치는 폴리디메틸실록산(poly(dimethylsiloxane),PDMS),폴리메틸메타클릴레이트(polymethylmethacrylate, PMMA), 폴리아크리레이트(polyacrylates), 폴리카보네이트(polycarbonates), 폴리시클릭 올레핀(polycyclic olefins), 폴리이미드(polyimides) 및 폴리우레탄(polyurethanes)으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 고분자 재질로 제작된 미세유체 칩 또는 wellplate용 노출기구를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 나노물질은 금나노, 은나노, SWCNT(single-walled carbon nanotube), MWCNT(multi-walled carbon nanotube),풀러린(fullerene, C60), 철 나노입자, 카본블랙, 이산화티탄, 산화알루미늄, 산화세륨, 산화아연, 이산화규소, 폴리스틸렌, 덴드리머, 나노클레이로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 나노물질인 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 나노물질 위해성 평가방법은유세포 분석법, 세포 이미지 분석법, 또는 역상노출기구를 이용한 분석법과 조합하여 수행될 수 있는 것을 특징으로 하는 방법
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제16항에 있어서, 상기 나노물질 위해성 평가방법은 미세유체칩과 결합되어 수행될 수 있는 것을 특징으로 하는 방법
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