1 |
1
서열번호 1 의 서열로 이루어진, α-1,2 푸코실 전달효소를 코딩하는 DNA
|
2 |
2
제 1 항에 따른 DNA 를 포함하는 재조합 DNA 벡터
|
3 |
3
제 2 항에 있어서, 상기 α-1,2 푸코실 전달효소를 코딩하는 DNA 의 5'-말단에 융합단백질을 코딩하는 DNA가 위치하는 것을 특징으로 하는, 재조합 DNA 벡터
|
4 |
4
제 3 항에 있어서, 상기 α-1,2 푸코실 전달효소의 유전자를 코딩하는 DNA와 상기 융합단백질을 코딩하는 DNA의 사이에 3개 내지 60개의 뉴클레오티드로 이루어진 스페이서를 가지는 것을 특징으로 하는 재조합 DNA 벡터
|
5 |
5
제 2 항에 따른 재조합 DNA 벡터로 형질 전환된 숙주세포
|
6 |
6
제 3 항에 따른 재조합 DNA 벡터로 형질 전환된 숙주 세포
|
7 |
7
제 4 항에 따른 재조합 DNA 벡터로 형질 전환된 숙주세포
|
8 |
8
제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 숙주세포는 샤페론 단백질을 코딩하는 재조합 DNA 벡터가 추가로 형질 전환된 것을 특징으로 하는, 형질 전환된 숙주세포
|
9 |
9
제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 따른 형질 전환된 숙주세포의 추출물
|
10 |
10
서열번호 2 로 표시되는 α-1,2 푸코실 전달효소의 249 번째의 아미노산이 타이로신(tyrosine)으로 치환된 것을 특징으로 하는, 서열번호 6의 아미노산 서열로 표시되는 α-1,2 푸코실 전달효소 변이체
|
11 |
11
삭제
|
12 |
12
제 10 항에 따른 α-1,2 푸코실 전달효소 변이체를 코딩하는, 서열번호 7로 표시되는 DNA
|
13 |
13
제 12 항에 따른 DNA 를 포함하는 재조합 DNA 벡터
|
14 |
14
제 13 항에 따른 재조합 DNA 벡터로 형질 전환된 숙주세포
|
15 |
15
제 14 항에 따른 형질 전환된 숙주세포의 추출물
|
16 |
16
제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 따른 형질 전환된 숙주세포로부터 발현된 α-1,2 푸코실 전달효소의 폴리펩타이드, 또는 제 10 항에 따른 α-1,2 푸코실 전달효소 변이체의 폴리펩타이드의 C-말단에 2개 내지 40개의 아미노산으로 이루어진 펩타이드 (peptide) 링커를 포함하는 폴리펩타이드
|
17 |
17
제 16 항에 있어서, 상기 펩타이드 링커는 글리신, 알라닌, 세린, 트레오닌, 및 시스테인으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 구성된 것을 특징으로 하는, 폴리펩타이드
|
18 |
18
서열번호 1 의 서열로 이루어진, α-1,2 푸코실 전달효소를 코딩하는 DNA를 포함하는 벡터로 형질 전환된 숙주세포 또는 상기 숙주세포의 추출물을 생촉매로 사용하는 것을 특징으로 하는, α-1,2 푸코실올리고당의 제조 방법
|
19 |
19
제 18 항에 있어서, 상기 벡터는 α-1,2 푸코실 전달효소를 코딩하는 DNA의 5'-말단에 융합단백질을 코딩하는 DNA가 도입된 것을 특징으로 하는, α-1,2 푸코실올리고당의 제조 방법
|
20 |
20
제 19 항에 있어서, 15℃ 내지 38℃의 온도에서 0
|
21 |
21
제 18 항에 있어서, 상기 숙주세포는 샤페론 단백질을 코딩하는 재조합 DNA 벡터가 추가로 형질 전환된 것을 특징으로 하는, α-1,2 푸코실올리고당의 제조 방법
|
22 |
22
제 21 항에 있어서, 10℃ 내지 35℃의 온도에서 0
|
23 |
23
제 18 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서, 당 수용체 기질의 농도를 푸코오스의 공여체인 구아노신 5'-이인산-푸코오스(guanosine 5'-diphosphate fucose, GDP-fuc) 기질 농도 이상으로 사용하는 것을 특징으로 하는, α-1,2 푸코실올리고당의 제조 방법
|
24 |
24
하기의 단계를 포함하는, 제 10 항에 따른 α-1,2 푸코실 전달효소 변이체의 탐색 방법:(1) α-1,2 푸코실 전달효소의 결정 구조 또는 모델 구조의 아스파테이트 115번(D115)으로부터 5 내지 10 Å 이내에서 선택된 잔기, 또는 α-1,2 푸코실 전달효소의 기질 결합 모델 구조로부터 수용체 기질이 결합하는 부위로부터 5 내지 10 Å 이내에서 선택된 잔기 중에서, 다수 서열 정렬과 알라닌 스캐닝을 통해 포화변이를 포화변이를 수행할 기능적 잔기를 분석하는 단계,(2) pH 지시약을 이용한 비색법(colorimetric method)을 수행하는 단계
|