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다중 삽입 영양 요구성 선별 표지 재순환용 효모 재조합벡터 시스템

  • 기술번호 : KST2020006919
  • 담당센터 : 서울서부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-6124-6930
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지 재순환용 효모 재조합벡터 시스템에 관한 것으로서, 상세하게는 사카로마이세스 세레비시애(Sacchoromyces cerevisiae) 효모에서 숙주 염색체로 다중 삽입된 선별 표지 유전자를 동시에 비활성화시킴으로 선별 표지를 재순환하는 효모용 벡터 세트 및 이를 이용한 다중 삽입 선별 마커 재순환 균주 제작 기술에 관한 것이다. 재조합 효모 균주에서 유전자 가위(CRISPR/Cas9)-gRNA 통합 벡터와 공여 DNA를 함께 형질전환시켜 다중으로 삽입된 선별 표지 유전자의 결손을 동시다발적으로 야기시켜 기존의 유전적 선별 표지를 다시 사용할 수 있는 기술로서 바이오산업에 유용한 재조합 단백질 및 대사산물 생산 숙주 제작에 응용이 가능하다. 특히, 본 발명은 다양한 영양요구성 선별표지를 대상으로 다중 삽입 선별 표지를 재순환함으로써 여러 외래 유전자들을 숙주의 염색체로 계속적으로 삽입시킬 수 있어 다양한 재조합 단백질 및 유용 대사산물을 대량 생산하는 GRAS 급의 재조합 효모 균주 제작을 가능하게 한다.
Int. CL C12N 15/81 (2006.01.01) C12N 9/22 (2006.01.01) C12N 15/10 (2017.01.01) C12N 15/113 (2010.01.01) C12N 15/65 (2006.01.01)
CPC C12N 15/81(2013.01)C12N 15/81(2013.01)C12N 15/81(2013.01)C12N 15/81(2013.01)C12N 15/81(2013.01)C12N 15/81(2013.01)
출원번호/일자 1020180142664 (2018.11.19)
출원인 중앙대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-2117946-0000 (2020.05.27)
공개번호/일자 10-2020-0058094 (2020.05.27) 문서열기
공고번호/일자 (20200602) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2018.11.19)
심사청구항수 9

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 중앙대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 동작구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 강현아 서울특별시 서초구
2 문혜연 서울특별시 동작구
3 심규헌 서울특별시 동작구
4 유시경 서울특별시 서초구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인태백 대한민국 서울 금천구 가산디지털*로 *** 이노플렉스 *차 ***호

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 중앙대학교 산학협력단 서울특별시 동작구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2018.11.19 수리 (Accepted) 1-1-2018-1149996-91
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2019.03.18 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2019.05.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2019-0130537-40
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.07.29 수리 (Accepted) 4-1-2019-5151122-15
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.08.01 수리 (Accepted) 4-1-2019-5153932-16
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2019.11.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0856842-10
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2020.01.22 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0076438-71
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2020.01.22 수리 (Accepted) 1-1-2020-0076437-25
9 등록결정서
Decision to grant		 2020.05.20 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0345301-15
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번호 청구항
1 1
Cas9 유전자 및 영양 요구성 선별 표지 유전자를 표적으로 하는 가이드 RNA(guide RNA; gRNA)를 포함하는 통합형 유전자가위(CRISPR/Cas9) 재조합벡터; 및 영양 요구성 선별 표지 유전자 변이 도입용 공여(Donor) DNA를 포함하며, 상기 영양 요구성 선별 표지 유전자 변이 도입용 공여(Donor) DNA는 서열번호 5로 표시되는 URA3 유전자 변이 도입용 공여(Donor) DNA, 서열번호 6으로 표시되는 TRP1 유전자 변이 도입용 공여(Donor) DNA, 서열번호 7로 표시되는 LEU2 유전자 변이 도입용 공여(Donor) DNA 또는 서열번호 8로 표시되는 HIS3 유전자 변이 도입용 공여(Donor) DNA인 것을 특징으로 하는 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지 재순환용 효모 재조합벡터 시스템
2 2
제1항에 있어서, 상기 영양 요구성 선별 표지 유전자는 URA3 유전자, TRP1 유전자, LEU2 유전자 또는 HIS3 유전자인 것을 특징으로 하는 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지 재순환용 효모 재조합벡터 시스템
3 3
제1항에 있어서, 상기 영양 요구성 선별 표지 유전자를 표적으로 하는 가이드 RNA는 서열번호 1로 표시되는 URA3 유전자 표적 gRNA, 서열번호 2로 표시되는 TRP1 유전자 표적 gRNA, 서열번호 3으로 표시되는 LEU2 유전자 표적 gRNA 또는 서열번호 4로 표시되는 HIS3 유전자 표적 gRNA인 것을 특징으로 하는 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지 재순환용 효모 재조합벡터 시스템
4 4
제1항에 있어서, 상기 통합형 유전자가위(CRISPR/Cas9) 재조합벡터는 도 2(A), 도 2(B), 도 2(C) 또는 도 2(D)의 개열지도를 갖는 것을 특징으로 하는 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지 재순환용 효모 재조합벡터 시스템
5 5
삭제
6 6
삭제
7 7
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시애(Sacchoromyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지 재순환용 효모 재조합벡터 시스템
8 8
(1) 염색체 내에 영양 요구성 선별 표지가 다중으로 삽입된 재조합 효모를 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지 재순환용 효모 재조합벡터 시스템으로 형질전환시키는 단계; 및(2) 상기 형질전환체들 중에서 염색체 내에 영양 요구성 선별 표지 유전자에 변이가 도입된 형질전환체를 선별하는 단계를 포함하는 효모 염색체 내에 영양 요구성 선별 표지가 다중으로 삽입된 재조합 효모에서 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지를 재순환하는 방법
9 9
제8항에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시애(Sacchoromyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 효모 염색체 내에 영양 요구성 선별 표지가 다중으로 삽입된 재조합 효모에서 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지를 재순환하는 방법
10 10
제8항에 있어서, 상기 염색체 내에 영양 요구성 선별 표지가 다중으로 삽입된 재조합 효모는 사카로마이세스 세레비시애(Sacchoromyces cerevisiae) 리보좀 DNA 비전사 지역(ribosomal DNA nontranscribed spacer; rDNA NTS)에 영양 요구성 선별 표지가 다중으로 삽입된 재조합 효모인 것을 특징으로 하는 효모 염색체 내에 영양 요구성 선별 표지가 다중으로 삽입된 재조합 효모에서 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지를 재순환하는 방법
11 11
제8항에 있어서, 상기 (2) 단계의 염색체 내에 영양 요구성 선별 표지 유전자에 변이가 도입된 형질전환체는 상기 영양 요구성 선별 표지 유전자에 단백질 합성 종결 코돈(stop codon)이 도입되어, 상기 영양 요구성 선별 표지 유전자가 비활성화된 형질전환체인 것을 특징으로 하는 효모 염색체 내에 영양 요구성 선별 표지가 다중으로 삽입된 재조합 효모에서 다중 삽입 영양 요구성 선별 표지를 재순환하는 방법
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