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a) 표적 RNA를 함유하는 핵산의 절단 및 중합 연쇄 반응 시스템 기반 등온 핵산 증폭(NESBA) 반응 용액을 제공하는 단계;b) 미세액적 발생 장치에 의하여 상기 NESBA 반응 용액으로부터 다수의 미세액적을 형성하는 단계; c) 상기 다수의 미세액적을 NESBA 테크닉에 의하여 증폭 반응시키는 단계; 및d) 상기 증폭된 다수의 미세액적에 대한 디지털 방식의 분석을 수행함으로써 표적 RNA를 검출하는 단계;를 포함하며,상기 단계 c)는 하기의 단계를 포함하는 표적 RNA의 검출 방법:(i) 표적 RNA와 상보적인 서열, T7 프로모터 서열 및 DNA 절단효소 인식부위 염기서열을 포함하는 제1 프라이머와 표적 RNA를 혼성화시킨 후, 역전사 효소를 이용하여 표적 RNA의 상보적 DNA를 생성시키는 단계;(ii) 상기 단계 (i)에서 생성된 상보적 DNA와 결합되어 있는 표적 RNA를 RNA 분해효소에 의하여 분해시키는 단계;(iii) 상기 상보적 DNA와 상보적인 서열 및 절단효소 인식 염기서열을 포함하는 제2 프라이머와 상기 상보적 DNA를 혼성화시킨 후, 역전사 효소를 이용하여 T7 프로모터 및 절단효소 인식 염기서열이 포함된 이중가닥 DNA를 생성시키는 단계;(iv) 상기 단계 (iii)에서 생성된 이중가닥 DNA에 DNA 절단효소를 처리하여 상기 이중가닥 DNA의 DNA 절단효소 인식부위를 절단한 다음, DNA 중합효소를 이용하여 T7 프로모터를 포함하는 이중가닥 DNA를 증폭시키는 단계; 및(v) T7 RNA 중합효소를 이용하여 상기 단계 (iv)에서 증폭된 T7 프로모터를 포함하는 이중가닥 DNA로부터 안티-센스 RNA를 생성시킨 다음, 상기 생성된 안티-센스 RNA를 검출하는 단계
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제1항에 있어서, 상기 제1 프라이머는 서열번호 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제3항에 있어서, 상기 제2 프라이머는 서열번호 2로 표시되는 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 NESBA 반응 용액은 표지 물질로서 형광 표지를 포함하고, 상기 단계 d)는 상기 증폭 반응에 의하여 미세액적 내 표지 물질로부터 유래하는 형광 시그널을 기초로 하여 수행되는 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제5항에 있어서, 상기 표지 물질은 분자 비콘 프로브 또는 TaqMan 프로브인 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 단계 b)에서 생성된 미세액적의 개수는 10000 내지 40000 범위인 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 단계 b)에서 생성된 다수의 미세액적 각각의 사이즈는 20 내지 300 ㎛ 범위인 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 단계 c)는 38 내지 45 ℃ 범위 내에서 선정된 온도에서 등온 증폭되는 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 NESBA 반응 용액 내 제1 프라이머 및 제2 프라이머 각각의 농도는 0
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제5항에 있어서, 상기 NESBA 반응 용액 내 표지 물질의 농도는 0
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제1항에 있어서, 상기 방법의 검출 한계는 0
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제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 표적 RNA는 H3N2 인플루엔자 바이러스의 gRNA인 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 단계 (iv)에서 DNA 중합효소는 클레노우 단편(Klenow fragment)인 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제13항에 있어서, 상기 단계 c)는 43℃에서 등온 증폭되는 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제1항에 있어서, 상기 제1 프라이머는 서열번호 6으로 표시되는 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제16항에 있어서, 상기 제2 프라이머는 서열번호 7로 표시되는 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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제16항 또는 제17항에 있어서, 상기 표적 RNA는 호흡기 세포융합 바이러스(Respiratory syncytial virus, RSV)의 RNA인 것을 특징으로 하는 표적 RNA의 검출 방법
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