1 |
1
ERG5 및 ERG6 유전자가 결손되고, DHCR24 및 DHCR7 유전자가 도입된 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주로서,상기 DHCR24와 DHCR7 유전자 둘 중 하나 이상의 유전자의 카피수(copy number)가 4 ~ 10 으로 다중으로 도입되며,상기 DHCR24 유전자가 ERG6 유전자 자리에 도입되고, 상기 DHCR7 유전자가 ERG5 유전자 자리에 도입되거나; 또는 DHCR24 유전자가 ERG5 유전자 자리에 도입되고 상기 DHCR7 유전자가 ERG6 유전자 자리에 도입되며; 추가적으로 도입되는 DHCR24 또는 DHCR7 유전자는 효모 균주의 리보좀 DNA 비전사 지역(ribosomal DNA nontranscribed spacer; rDNA NTS)에 도입되고,상기 스테롤은 콜레스테롤 전구체 또는 콜레스테롤 둘 중 하나 이상을 포함하고,상기 콜레스테롤 전구체는 지모스테롤, 디하이드로콜레스테롤, 라쏘스테롤, 디하이드로데스모스테롤 및 데스모스테롤로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주
|
2 |
2
청구항 1에 있어서,상기 재조합 효모 균주에는 ERG3, ERG2, ERG27 및 UPC2-1 유전자로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자가 추가로 도입되는 것을 특징으로 하는, 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주
|
3 |
3
청구항 1에 있어서,상기 재조합 효모 균주에는 ERG27-ERG2 융합 단백질을 코딩하는 합성 유전자가 추가로 도입되는 것을 특징으로 하는, 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주
|
4 |
4
청구항 1에 있어서,상기 DHCR24 유전자는 ERG6 유전자 자리에 도입되고,상기 DHCR7 유전자는 ERG5 유전자 자리에 도입되는 것을 특징으로 하는, 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주
|
5 |
5
청구항 1에 있어서,상기 재조합 균주는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae) 리보좀 DNA 비전사 지역(ribosomal DNA nontranscribed spacer; rDNA NTS)의 N 말단 단편 유전자, 삽입 목적 유전자, 프로모터 영역을 포함하는 영양요구성 선택 표지 마커 유전자 및 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae) rDNA NTS의 C 말단 단편 유전자를 순서대로 포함하는 유전자 다중 삽입 카세트를 이용하여 제조되고,상기 유전자 다중 삽입 카세트의 rDNA NTS의 N 말단 단편 유전자는 서열번호 1로 표시되고, 상기 rDNA NTS의 C 말단 단편 유전자는 서열번호 2로 표시되는 것을 특징으로 하는, 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주
|
6 |
6
ERG5 및 ERG6 유전자가 결손되고, DHCR24 및 DHCR7 유전자가 도입된 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주로서,상기 DHCR24 및 DHCR7 유전자는 코돈 콘텍스트 방식으로 코돈 최적화된 것으로, 각각 서열번호 17 및 서열번호 18로 구성되는 것이고, 상기 스테롤은 콜레스테롤 전구체 또는 콜레스테롤 둘 중 하나 이상을 포함하고, 상기 콜레스테롤 전구체는 지모스테롤, 디하이드로콜레스테롤, 라쏘스테롤, 디하이드로데스모스테롤 및 데스모스테롤로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하고,상기 재조합 효모균주는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 재조합 효모균주
|
7 |
7
청구항 1에 있어서,상기 재조합 효모 균주는 tHMG1 유전자가 숙주의 염색체 상으로 추가 도입된 것을 특징으로 하는 재조합 효모 균주
|
8 |
8
스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주의 제조방법에 있어서, 효모 균주의 ERG5 및 ERG6 유전자를 결손시킨 후 DHCR24 및 DHCR7 유전자를 도입하는 단계를 포함하되,상기 DHCR24와 DHCR7 유전자 둘 중 하나 이상의 유전자의 카피수(copy number)를 4 ~ 10 으로 다중으로 도입하고, 상기 DHCR24 유전자를 ERG6 유전자 자리에 도입하고 상기 DHCR7 유전자를 ERG5 유전자 자리에 도입하거나, 또는 DHCR24 유전자를 ERG5 유전자 자리에 도입하고 상기 DHCR7 유전자를 ERG6 유전자 자리에 도입하며,상기 DHCR24 또는 DHCR7 유전자는 효모 균주의 리보좀 DNA 비전사 지역(ribosomal DNA nontranscribed spacer; rDNA NTS)에 도입되고,상기 스테롤은 콜레스테롤 전구체 또는 콜레스테롤 둘 중 하나 이상을 포함하고, 상기 콜레스테롤 전구체는 지모스테롤, 디하이드로콜레스테롤, 라쏘스테롤, 디하이드로데스모스테롤 및 데스모스테롤로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주의 제조방법
|
9 |
9
청구항 12에서,상기 DHCR24 및 DHCR7 유전자 도입은, 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae) 리보좀 DNA 비전사 지역(ribosomal DNA nontranscribed spacer; rDNA NTS)의 N 말단 단편 유전자, 삽입 목적 유전자, 프로모터 영역을 포함하는 영양요구성 선택 표지 마커 유전자 및 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae) rDNA NTS의 C 말단 단편 유전자를 순서대로 포함하는 유전자 다중 삽입 카세트를 이용하여 수행하고,상기 유전자 다중 삽입 카세트의 rDNA NTS의 N 말단 단편 유전자는 서열번호 1로 표시되고, 상기 rDNA NTS의 C 말단 단편 유전자는 서열번호 2로 표시되는 것을 특징으로 하는, 스테롤 생산능을 갖는 재조합 효모 균주의 제조방법
|
10 |
10
청구항 1 내지 7 중 어느 한 항의 재조합 효모 균주를 배지에 배양하여 스테롤을 생산하는 방법
|
11 |
11
청구항 10에 있어서,상기 배양은 25 ~ 35 ℃에서 2 ~ 10일 동안 수행하는 것을 특징으로 하는, 스테롤을 생산하는 방법
|